[发明专利]血浆游离DNA甲基化检测文库的构建方法、试剂盒及应用在审
| 申请号： | 201711011500.5 | 申请日： | 2017-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN107541791A | 公开（公告）日： | 2018-01-05 |
| 发明（设计）人： | 孙英丽;任善成;常双 | 申请（专利权）人： | 中国科学院北京基因组研究所 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京瑞思知识产权代理事务所(普通合伙)11341 | 代理人： | 李涛 |
| 地址： | 100101 北京市朝阳区北辰西*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种血浆游离DNA甲基化检测文库的构建方法、试剂盒及应用。其中，该构建方法包括以下步骤S1，从血液样本中提取血浆游离DNA；S2，对血浆游离DNA进行末端修复及3’端添加A碱基；S3，将S2得到的血浆游离DNA的末端连接C甲基化修饰的接头；S4，对S3得到的产物进行重亚硫酸盐转化，并进行PCR扩展；S5，对S4的PCR产物进行磁珠纯化，去除掉未非特异性扩增的小片段DNA及引物二聚体；以及S6，对S5的产物进行PCR扩增，并进行磁珠纯化，得到血浆游离DNA甲基化检测文库。应用本发明的技术方案，降低了常规微量甲基化建库起始量，简化了建库步骤并提高了文库回收效率，为后续通过血浆游离DNA甲基化差异位点筛选肿瘤诊断标志物奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 血浆 游离 dna 甲基化 检测 文库 构建 方法 试剂盒 应用 | ||
【主权项】：
一种血浆游离DNA甲基化检测文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，从血液样本中提取血浆游离DNA；S2，对所述血浆游离DNA进行末端修复及3’端添加A碱基；S3，将所述S2得到的血浆游离DNA的末端连接C甲基化修饰的接头；S4，对所述S3得到的产物进行重亚硫酸盐转化，并进行PCR扩展；S5，对所述S4的PCR产物进行磁珠纯化，去除掉未非特异性扩增的小片段DNA及引物二聚体；以及S6，对所述S5的产物进行PCR扩增，并进行磁珠纯化，得到所述血浆游离DNA甲基化检测文库。
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