[发明专利]一种肉葡萄球菌合成培养基及其发酵液的制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种肉葡萄球菌合成培养基及其发酵液的制备方法及应用。其中肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)合成培养基，是按1L体积计算，由如下重量的原料组成：无水葡萄糖10~50g，赖氨酸0.1~1.5g，缬氨酸1.0~5.0g，甘氨酸0.1~1.5g，精氨酸1.0~5.0g，脯氨酸1.0~5.0g，谷氨酸5~10.0g，色氨酸0.1~0.5g，胱氨酸0.1~1.5g，盐酸硫胺素1.0~3.0mg，泛酸钙1.0~3.0mg，烟酸1.0~3.0mg，硫酸锰1.0~3.0mg，磷酸二氢钾0.1~1.0g，七水硫酸镁0.1~0.8g，七水硫酸亚铁0.005~0.010g，三水磷酸氢二钾1.0~5.0g，3‑(N‑吗啉)丙磺酸6~10g，剩余为水；还公开了肉葡萄球菌发酵液的制备方法。本发明的肉葡萄球菌合成培养基配方搭配合理，营养丰富，适合肉葡萄球菌的生长需求，通过本发明方法获得的肉葡萄球菌的生长量与通常所用的LB（Luria‑Bertani）培养基相比提高了5%。

主权项

一种重组质粒pBT2‑ET‑5R‑EGFP的构建方法，其特征在于按如下的步骤进行：穿梭载体pBT2‑ET‑5R‑EGFP：以pBT2质粒为骨架，在其KpnI和NheI克隆位点之间插入一个tat‑egfp融合基因制备得到；该EGFP融合基因的启动子为肉葡萄球菌ATCC 51365的eftu基因的启动子序列（GenBank Accession No: 7551602），信号肽采用肉葡萄球菌ATCC 51365的efeB基因的tat信号肽序列（GenBank Accession No: AM295250），并在后续的EGFP基因（GenBank Accession No: AF302837）的N‑末端加入一个含有5个连续精氨酸序列（5R）的链接肽linker；其中从tat信号肽起始密码子到EGFP蛋白的碱基序列参照图5，其碱基序列如SEQ ID NO. 1所示，氨基酸序列参照图6，如SEQ ID NO. 2所示。