[发明专利]一种肉葡萄球菌合成培养基及其发酵液的制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种肉葡萄球菌合成培养基及其发酵液的制备方法及应用。其中肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)合成培养基，是按1L体积计算，由如下重量的原料组成：无水葡萄糖10~50g，赖氨酸0.1~1.5g，缬氨酸1.0~5.0g，甘氨酸0.1~1.5g，精氨酸1.0~5.0g，脯氨酸1.0~5.0g，谷氨酸5~10.0g，色氨酸0.1~0.5g，胱氨酸0.1~1.5g，盐酸硫胺素1.0~3.0mg，泛酸钙1.0~3.0mg，烟酸1.0~3.0mg，硫酸锰1.0~3.0mg，磷酸二氢钾0.1~1.0g，七水硫酸镁0.1~0.8g，七水硫酸亚铁0.005~0.010g，三水磷酸氢二钾1.0~5.0g，3‑(N‑吗啉)丙磺酸6~10g，剩余为水；还公开了肉葡萄球菌发酵液的制备方法。本发明的肉葡萄球菌合成培养基配方搭配合理，营养丰富，适合肉葡萄球菌的生长需求，通过本发明方法获得的肉葡萄球菌的生长量与通常所用的LB（Luria‑Bertani）培养基相比提高了5%。

技术领域

本发明属于微生物培养基和发酵技术领域，涉及一种肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)合成培养基及其发酵液的制备方法及应用。

背景技术

葡萄球菌（Staphylococcus）为平均直径在0.5-1.0μm的革兰氏阳性菌，因其堆叠起来的形状类似葡萄串珠而得名，一般不具有致病性。代表种有表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）和腐生葡萄球菌（Staphyloccocus saprophyticus）等。长期以来，人们将葡萄球菌用于干肠的发酵。起初，它们被认为是微球菌，但事实证明，这些微球菌被错误分类了，实际上是葡萄球菌。基于DNA/DNA杂交，生化特性和细胞壁组成，这些葡萄球菌形成了一种新的物种，命名为肉葡萄球菌（Staphylococcus carnosus），其可以从肉类发酵产物中分离出来，并于1950年开始被用作发酵起始剂。

肉葡萄球菌（S. carnosus）因为其不产生任何溶血素蛋白、毒素、凝固酶、蛋白质A或凝集因子，被世界公认为是食品级GRAS（generally recognized safe）葡萄球菌。肉葡萄球菌是肉制品发酵行业中形成肉制品风味的关键菌种，在欧洲等地被用作生肉产品起始培养物已经超过80年。在干香肠发酵成熟的过程中，肉葡萄球菌可先将硝酸盐还原为亚硝酸盐。这个反应的优点是硝酸盐的浓度降低，亚硝酸盐可与肌红蛋白（myoglobin,Mb）结合形成亚硝基血红蛋白（hemoglobin,Hb），使肉呈现典型的红色。然后亚硝酸盐进一步还原成氨，从而降低了未结合的亚硝酸盐浓度。在培养基和肉基质中，肉葡萄球菌均可将高铁肌红蛋白转化为红色肌红蛋白衍生物，使肉制品获得较好的色泽。肉葡萄球菌还产生能够水解蛋白质的酶，干香肠发酵过程中酶的分解产物能形成独特的风味。此外，其的胞外蛋白水解能力很低，因此可用做基因克隆技术的宿主菌，这样就可以研究这类菌的相关代谢途径和它们分泌和表达异源蛋白的情况。本研究所用菌种为肉葡萄球菌的重组菌：Staphylococcus carnosus ATCC 51365/pBT2-ET-5R-EGFP，带有增强型绿色荧光蛋白的肉葡萄球菌，一方面提高菌种的生长状况，另一方面制备其发酵液。