[发明专利]一种中药组合物中十八种成分的分离方法

摘要

本发明提供一种中药组合物的化学成分的分离方法，在其总浸膏大孔吸附树脂柱的30%乙醇部位分离并鉴定了18个化合物，分别为连翘酯苷A(1)、连翘酯苷I(2)、连翘酯苷H(3)、Lugrandoside(4)、Isolugrandoside(5)、Ferruginoside A(6)、Lianqiaoxingan C(7)、Calceolarioside C(8)、连翘酯苷E(9)、Ferruginoside B(10)、D‑苦杏仁苷(11)、L‑苦杏仁苷(12)、Sambunigrin(13)、Cornoside(14)、4‑Hydroxy‑4‑methylenecarbomethoxy‑cyclohexa‑2,5‑dienone(15)、Liriodendrin(16)、甘草素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(17)、3,4‑二羟基苯甲醛(18)。其中，化合物2‑8,10,13‑18为首次从本发明总浸膏中分离得到，化合物4‑6,10,15,16未见从复方单味药中分离的报道，并首次对化合物8在DMSO‑d6溶剂中的核磁数据进行归属。

主权项

1.一种中药组合物中十八种成分的分离方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200‑300 、麻黄60‑100 、大黄40‑60 、鱼腥草200‑300、金银花200‑300 、板蓝根200‑300、广藿香60‑100、绵马贯众200‑300、红景天60‑100、薄荷脑5‑9、苦杏仁60‑100 、甘草60‑100 、石膏200‑300，其特征在于，所述分离方法包括以下步骤：（1）该中药组合物总浸膏经AB‑8型号大孔树脂分离，依次用水、10%乙醇、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，回收溶剂，得30%乙醇浸膏；（2）将步骤（1）得到的30%乙醇浸膏，加入反相硅胶ODS‑AQ‑HG，S‑50μm，拌样，待拌样ODS自然晾干后，将拌样ODS加入到上样柱内，上中压制备液相进行分离，分离柱填料为ODS‑AQ‑HG，S‑50μm，，依次用10%甲醇，根据洗脱顺序得到5个流份，分别编号为10%‑1、10%‑2、10%‑3、10%‑4、10%‑5；20%甲醇洗脱，根据洗脱顺序得到6个流份，分别编号为20%‑1、20%‑2、20%‑3、20%‑4、20%‑5和20%‑6，分别收集洗脱液，回收溶剂，得编号为10%‑1、10%‑2、10%‑3、10%‑4、10%‑5洗脱干膏和20%‑1、20%‑2、20%‑3、20%‑4、20%‑5和20%‑6洗脱干膏；（3）将步骤（2）得到的编号为10%‑1洗脱干膏，用30%甲醇溶解，溶解液过0.45μm微孔滤膜，采用高效液相色谱法进行初步分离，流动相为甲醇‑水 22:78，流速为1ml/min，检测波长210nm，分别收集保留时间为3‑9min、9‑11min、19‑22min、22‑26min、26‑30min、37‑41min、和44‑48min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：3‑9min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 5:95，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间25‑27min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物14：Cornoside；9‑11min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 12:88，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间32‑35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物10：Ferruginoside B；19‑22min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间31‑35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物9：连翘酯苷E；22‑26min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间32‑37min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物18：3,4‑二羟基苯甲醛；26‑30min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间38‑42min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物11：D‑苦杏仁苷 和化合物12：L‑苦杏仁苷的混合物；37‑41min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间52‑56min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物13：Sambunigrin；44‑48min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间41‑44min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物15：4‑Hydroxy‑4‑methylenecarbomethoxy‑cyclohexa‑2,5‑dienone；（4）将步骤（2）得到的编号为20%‑2洗脱干膏，用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：甲醇‑水, 22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10μm，分别收集保留时间为14‑17min、17‑19min、22‑24min、29‑34min和35‑40min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：14‑17min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈‑水, 15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间38‑40min和45‑47min的色谱峰，其中45‑47min色谱峰减压回收溶剂后，得到化合物化合物7 ：Lianqiaoxingan C；保留时间为38‑40min色谱峰，减压回收溶剂后再经高效液相色谱法纯化，流动相：乙腈‑水, 13:87，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，收集此条件下52‑56min色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物6 ：Ferruginoside A；17‑19min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈‑水, 15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间28‑30min和37‑44min的色谱峰，减压回收溶剂后，分别得到化合物16：Liriodendrin，和化合物2：连翘酯苷I；22‑24min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈‑水, 17:83，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间22‑25min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物8： Calceolarioside C；29‑34min色谱峰，在减压回收溶剂后，在放置过程中有白色固体析出，5000rpm离心得到化合物17：甘草素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷；上清液经高效液相进一步纯化，流动相：乙腈‑水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间40‑45min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物3：连翘酯苷H；35‑40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈‑水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间34‑45min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物1：连翘酯苷A；（5）将步骤（2）得到的编号为20%‑4和20%‑5流份合并，采用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：乙腈‑水, 15:85，流速：15ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，分别收集保留时间为15‑17 min和35‑40 min的色谱峰，并减压回收溶剂；其中，5‑17 min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈‑水, 15:85，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间15‑16min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物5：Isolugrandoside；35‑40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 25:75，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间26‑29min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物4：Lugrandoside。