[发明专利]检测鸡鼻炎型克雷伯氏菌的环介导等温扩增试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及检测鸡鼻炎型克雷伯氏菌的环介导等温扩增试剂盒及其检测方法，通过在环介导等温扩增体系中加入右旋糖苷和黄芪多糖至终浓度均为0.05～0.25mol/L(以葡萄糖计)，提高了聚合酶的稳定性，可部分替代普通LAMP试剂盒中价格昂贵的“聚合酶”和“甜菜碱”，可很好的促进高含量GC片段的扩增，可以将检测反应时间减少到20‑30分钟，能够降低检测成本同时缩短检测周期，对环介导等温扩增在病原微生物中检测具有重要意义。

主权项

检测鸡鼻炎型克雷伯氏菌的环介导等温扩增试剂盒，其特征在于，包括如下组分：环介导等温扩增内引物和外引物，嗜热乳酸枯草芽孢杆菌DNA聚合酶、10×热聚合反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物、硫酸镁、甜菜碱、右旋糖苷、黄芪多糖和荧光染料赛博绿Ⅰ；所述10×热聚合反应缓冲液由浓度为150‑250mmol/L、pH为8.5‑8.8的三羟基甲基氨基甲烷‑盐酸、浓度为50‑100mmol/L的氯化钾、浓度为50‑100mmol/L的硫酸铵、浓度为15‑20mmol/L的硫酸镁和质量分数为0.5‑1％的曲拉通X‑100组成；所述三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物由三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸组成；所述环介导等温扩增内引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述外引物序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。