[发明专利]一种小麦外源基因插入位点的鉴定方法在审
| 申请号： | 201710698017.2 | 申请日： | 2017-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN107419021A | 公开（公告）日： | 2017-12-01 |
| 发明（设计）人： | 丁博;谢晓东;郭雨;李明;曹雪松;李杨;詹瑶;邢欣欣;曹高燚;佟德清 | 申请（专利权）人： | 天津农学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 300000 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种小麦外源基因插入位点的鉴定方法，属于转基因作物鉴定技术领域。本发明提供的鉴定方法包括以下步骤1)提取小麦基因组；2)设计3条嵌套的特异引物SP1、SP2和SP3；3)以步骤2)得到的特异性引物SP1、SP2和SP3与染色体步移试剂盒结合进行热不对称交错PCR反应，得到扩增片段；4)将步骤3)得到的扩增片段与国际小麦基因组测序联合会小麦基因组数据进行比对，得出外源基因在小麦中的插入位点。本发明提供的鉴定方法假阳性出现概率低，能够精确地定位外源基因的插入位置，对于后期转基因植株功能的研究具有深远的意义，为创育小麦新种质资源奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 小麦 基因 插入 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
一种小麦外源基因插入位点的鉴定方法，包括以下步骤：1)以农杆菌介导法转化后的小麦为材料提取小麦基因组；2)依据Genome‑walking的原理，基于步骤1)转化用载体的T‑DNA序列，设计3条嵌套的特异引物SP1、SP2和SP3；3)以步骤2)得到的特异性引物SP1、SP2和SP3与染色体步移试剂盒结合进行热不对称交错PCR反应，得到扩增片段；4)将步骤3)得到的扩增片段与国际小麦基因组测序联合会小麦基因组数据进行比对，得出外源基因在小麦中的插入位点。
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