[发明专利]一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法

摘要

本发明涉及丝素蛋白提取领域，公开了一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法，采用碱法脱胶对柞蚕丝进行处理，得到丝素纤维；将丝素纤维与预先制备的[AMIM]Cl离子液体混合，在油浴中搅拌加热一定时间，对柞蚕丝进行初步溶解，再加入PM13‑碱性蛋白酶进行酶解，利用离子液体和PM13‑碱性蛋白酶对丝素蛋白进行逐步溶解，通过加入无水乙醇去除离子液体，使得到的丝素蛋白再次溶解在去离子水中，通过透析和冷冻干燥即可得到纯净的丝素蛋白粉末。这种柞蚕丝丝素蛋白的提取方法具有反应条件温和、化学试剂用量少、离子液体可回收，可对柞蚕丝丝素蛋白进行有效溶解。

主权项

一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法，其特征在于，以g和mL计，包括以下步骤：1）称取3.5‑4.5g柞蚕丝，用去离子水清洗，去除表面污染物，烘干；2）将烘干的柞蚕丝以1:95‑105的浴比在含有0.4‑0.6wt%的Na2PO4和0.8‑1.2wt%的C17H35COONa的混合溶液中煮沸25‑35min，进行脱胶处理，共脱胶四次；3）脱胶之后，将柞蚕丝用去离子水搓洗4次以上，放入55‑65℃烘箱，得到干燥的丝素纤维；4）称取1.8‑2.2g干燥的丝素纤维，以1:45‑55的浴比浸入[AMIM]Cl离子液体中，控制反应温度在80~100℃范围内，在油浴中搅拌5‑7h，反应完成后，冷却至室温；5）向步骤4）中离子液体内加入PM13‑碱性蛋白酶粉末0.25‑0.35g，在40~55℃的油浴中搅拌5‑7h，得到丝素/离子液体溶液后，进行灭酶；6）待丝素/离子液体溶液冷却至室温，加入无水乙醇，反复浸泡，使丝素蛋白析出，对混合物进行真空抽滤，向滤出的丝素蛋白中加入去离子水，反复浸泡后过滤，再将溶液装入透析袋中透析20‑28h，得到纯净的丝素蛋白溶液；7）对得到的丝素蛋白溶液进行冷冻干燥，即可得到丝素蛋白粉末。