[发明专利]一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法

权利要求书

1.一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法，其特征在于，以g和mL计，包括以下步骤：

1）称取3.5-4.5g柞蚕丝，用去离子水清洗，去除表面污染物，烘干；

2）将烘干的柞蚕丝以1:95-105的浴比在含有0.4-0.6wt%的Na₂PO₄和0.8-1.2wt%的C₁₇H₃₅COONa的混合溶液中煮沸25-35min，进行脱胶处理，共脱胶四次；

3）脱胶之后，将柞蚕丝用去离子水搓洗4次以上，放入55-65℃烘箱，得到干燥的丝素纤维；

4）称取1.8-2.2g干燥的丝素纤维，以1:45-55的浴比浸入[AMIM]Cl离子液体中，控制反应温度在80~100℃范围内，在油浴中搅拌5-7h，反应完成后，冷却至室温；

5）向步骤4）中离子液体内加入PM₁₃-碱性蛋白酶粉末0.25-0.35g，在40~55℃的油浴中搅拌5-7h，得到丝素/离子液体溶液后，进行灭酶；

6）待丝素/离子液体溶液冷却至室温，加入无水乙醇，反复浸泡，使丝素蛋白析出，对混合物进行真空抽滤，向滤出的丝素蛋白中加入去离子水，反复浸泡后过滤，再将溶液装入透析袋中透析20-28h，得到纯净的丝素蛋白溶液；

7）对得到的丝素蛋白溶液进行冷冻干燥，即可得到丝素蛋白粉末。

2.如权利要求1所述的一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法，其特征在于，步骤4）中，所述[AMIM]Cl离子液体的制备方法为：按1.0-1.5:1的摩尔比向反应容器中加入烯丙基氯和N-甲基咪唑，在55-65℃油浴中搅拌回流6~8h，反应完毕后，采用旋转蒸发除去过量的2-甲基烯丙基氯，得到浅黄色透明液体，即[AMIM]Cl离子液体，冷冻干燥20-28h后，解冻待用。

3.如权利要求1所述的一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法，其特征在于，步骤5）中，所述PM₁₃-碱性蛋白酶的制备方法为：向90-110mL的0.1M的硼酸钠缓冲溶液中加入0.10-0.20g碱性蛋白酶和3.5-4.0g PM₁₃，在1-5℃条件下缓慢搅拌0.5-1.5h，在外加45-55mL 1mmol/L HCl的条件下超滤除去未反应的PM₁₃，重复三次，将滤液进行冷冻干燥，得到PM₁₃-碱性蛋白酶粉末，待用。

4.如权利要求3所述的一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法，其特征在于，所述PM₁₃为MW15000梳状PEG。

5.如权利要求4所述的一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法，其特征在于，在PM₁₃-碱性蛋白酶的制备过程中，冷冻干燥前，预先在-20℃条件下冷冻4h。

6.如权利要求1所述的一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法，其特征在于，步骤5）中，灭酶时，在80℃以上的油浴中保温至少30min。

7.如权利要求1所述的一种利用离子液体和蛋白酶提取柞蚕丝丝素蛋白的方法，其特征在于，步骤6）中，所述透析袋的截留分子量为3500。