[发明专利]一种用于检测微卫星不稳定性的组合物及其应用

摘要

本发明公开了一种用于检测微卫星不稳定性的组合物及其应用，用于检测微卫星不稳定性的组合物包括分别针对用于检测待检样品中与微卫星不稳定性相关的特异性目的基因的引物对，用于检测微卫星不稳定性的试剂盒采用特异性的多重荧光PCR片段分析毛细管电泳法检测Bat 26、Bat 25、NR‑21、NR‑24、NR‑27、Mono‑27、D5S346、D2S123和D17S250这9个位点和Penta C、Penta D、Amel这3个位点的微卫星分布情况，用于判断微卫星是处于稳定还是不稳定状态。通过调整12对引物的配比、Taq酶的用量、镁离子的用量和PCR体系等，提高整个试剂盒的敏感性和特异性。

主权项

1.一种用于检测微卫星不稳定性的组合物，其特征在于，所述组合物由分别针对用于检测待检样品中与微卫星不稳定性相关的特异性目的基因的引物对组成，为：NR‑21基因正向引物F(NR‑21‑F)：SEQ ID NO.1，NR‑21基因反向引物R(NR‑21‑R)：SEQ ID NO.2；NR‑27基因正向引物F(NR‑27‑F)：SEQ ID NO.3，NR‑27基因反向引物R(NR‑27‑R)：SEQ ID NO.4；Penta D基因正向引物F(Penta D‑F)：SEQ ID NO.5，Penta D基因反向引物R(Penta D‑R)：SEQ ID NO.6；D5S346基因正向引物F(D5S346‑F)：SEQ ID NO.7，D5S346基因反向引物R(D5S346‑R)：SEQ ID NO.8；BAT‑25基因正向引物F(BAT‑25‑F)：SEQ ID NO.9，BAT‑25基因反向引物R(BAT‑25‑R)：SEQ ID NO.10；BAT‑26基因正向引物F(BAT‑26‑F)：SEQ ID NO.11，BAT‑26基因反向引物R(BAT‑26‑R)：SEQ ID NO.12；Penta C基因正向引物F(Penta C‑F)：SEQ ID NO.13，Penta C基因反向引物R(Penta C‑R)：SEQ ID NO.14；D2S123基因正向引物F(D2S123‑F)：SEQ ID NO.15，D2S123基因反向引物R(D2S123‑R)：SEQ ID NO.16；MONO‑27基因正向引物F(MONO‑27‑F)：SEQ ID NO.17，MONO‑27基因反向引物R(MONO‑27‑R)：SEQ ID NO.18；NR‑24基因正向引物F(NR‑24‑F)：SEQ ID NO.19，NR‑24基因反向引物R(NR‑24‑R)：SEQ ID NO.20；Amel基因正向引物F(Amel‑F)：SEQ ID NO.21，Amel基因反向引物R(Amel‑R)：SEQ ID NO.22；D17S250基因正向引物F(D17S250‑F)：SEQ ID NO.23，D17S250基因反向引物R(D17S250‑R)：SEQ ID NO.24；对NR‑21基因、NR‑27基因、Penta D基因和D5S346基因的正向引物的5’端进行FAM修饰；对BAT‑25基因、BAT‑26基因、Penta C基因和D2S123基因的正向引物的5’端进行HEX修饰；对MONO‑27基因、NR‑24基因、Amel基因和D17S250基因的正向引物的5’端进行TMR修饰；实现一管内多重荧光位点的检测；进行一次检测时，NR‑21‑F加入量0.1‑0.3μL，NR‑21‑R加入量0.1‑0.3μL，NR‑27‑F加入量0.01‑0.2μL，NR‑27‑R加入量0.01‑0.2μL，Penta D‑F加入量0.1‑0.3μL，Penta D‑R加入量0.1‑0.3μL，D5S346‑F加入量0.01‑0.2μL，D5S346‑R加入量0.01‑0.2μL，BAT‑25‑F加入量0.1‑0.3μL，BAT‑25‑R加入量0.1‑0.3μL，BAT‑26‑F加入量0.1‑0.3μL，BAT‑26‑R加入量0.1‑0.3μL，Penta C‑F加入量0.01‑0.2μL，Penta C‑R加入量0.01‑0.2μL，D2S123‑F加入量0.1‑0.3μL，D2S123‑R加入量0.1‑0.3μL，MONO‑27‑F加入量0.01‑0.2μL，MONO‑27‑R加入量0.01‑0.2μL，NR‑24‑F加入量0.01‑0.2μL，NR‑24‑R加入量0.01‑0.2μL，Amel‑F加入量0.1‑0.3μL，Amel‑R加入量0.1‑0.3μL，D17S250‑F加入量0.01‑0.2μL，D17S250‑R加入量0.01‑0.2μL。