[发明专利]一种多倍PCR扩增方法

摘要

本发明提供了一种多倍PCR扩增方法，即以一对5’端与通用引物相同的多个相同序列组成的多倍引物(低浓度)和一对通用引物(高浓度)在同一PCR反应中进行扩增，扩增中所用DNA聚合酶是具有链置换作用的耐热聚合酶。多倍引物序列包含两部分，即3’端与目标基因互补，5’端携带至少1个与通用引物相同的序列。上、下游多倍引物5’端携带通用引物的数目相同或不同，且上、下游通用引物的序列也可以相同或不同。本方法一次循环同时产生多个扩增产物，且每一个扩增产物除含有目标扩增序列外还含有至少一个上游和一个下游通用引物序列。本发明因一次循环可以产生超过两倍的扩增产物，故能显著提高PCR的扩增效率和检测灵敏度，适合作为常规分子生物学实验室手段和医学核酸检测手段用于低模板数基因的检测。

主权项

一种多倍PCR扩增方法，其特征在于：所述方法包括在反应混合物中进行所述扩增，所述反应混合物包含一对多倍引物和一对通用引物，以及具有链替换作用的耐热DNA聚合酶；以较低浓度的多倍引物在最初几个循环引发PCR，产生的第一扩增产物包含多个通用引物序列；以第一扩增产物为模板，使用较高浓度的通用引物扩增PCR，产生包含目标基因的多个第二扩增产物。