[发明专利]用于检测突变体的荧光实时检测试剂及方法

摘要

本发明提供用于检测突变体的荧光实时检测试剂及方法。具体地，本发明提供了一种新的检测突变(点突变、缺失和插入)的荧光(RT‑)PCR试剂、方法和反应体系。本发明设计3’末端与模板错配的荧光引物，利用非高保真DNA聚合酶的聚合酶活性和少量高保真DNA聚合酶的3’‑5’外切酶校正功能对突变体进行检测。本发明设计简单，操作快捷、灵敏性强、准确度高，可广泛用于点突变(耐药)、单核苷酸多态性、插入和缺失突变检测等相关的领域。

主权项

1.一种检测突变体的试剂，其特征在于，所述的试剂包括以下组分：(a)第一引物，所述第一引物结构如下式I所示：Z1‑Z2‑Z3‑F1   (I)式中，F1为荧光基团或淬灭基团；Z1为无或附加功能区，长度为L1个核苷酸；Z2为互补结合区，长度为L2个核苷酸；其中，Z1和Z2中至少一个与F2相连，其中F2为荧光基团或淬灭基团；并且F1和F2两者中一个为荧光基团，另一个为淬灭基团；Z3为3’端的位点识别区，所述识别区的长度为L3个核苷酸，并且所述的识别区中≥60％的核苷酸与待检测的模板检测区序列是非匹配的，并且L3为1‑5；(b)第二引物，所述第二引物为正常引物或与第一引物结构相同；(c)高保真DNA聚合酶，所述高保真DNA聚合酶为具有外切活性的DNA聚合酶；和(d)非高保真DNA聚合酶，所述非高保真DNA聚合酶不具有外切活性的DNA聚合酶。