[发明专利]一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法

摘要

本发明提供了一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法，分离来源丰富的人外周血CD4⁺T细胞，经过能符合临床药品生产质量管理规范(GMP)的简便诱导方法，在短期内将CD4⁺CD25^‑T细胞诱导并扩增成为高纯度、高调节效率的CD4⁺CD25⁺CD127^dim的抗原非特异性调节性T细胞。经过一个周期(6～7天)的诱导培养，即可获得足够治疗剂量的Treg，诱导的Treg表型和调节功能稳定，而且极大降低了由于长期体外培养可能出现的细胞活力减弱、微生物污染等事件的发生率，且质控方法特异快速，非常适合于临床应用。

主权项

1.一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法，其特征在于，步骤包括：S1、从人外周血中分离出外周血单个核细胞PBMC；S2、去除非CD4⁺ T细胞，再去除CD25⁺ T细胞，从而得到CD4⁺CD25^‑CD45RA⁺T细胞；S3、将CD4⁺CD25^‑CD45RA⁺ T细胞重悬于含5～10％AB型人血清或自体血清的AIM‑V CTS培养基，计数细胞总量，加入同等细胞数量的抗CD3/CD28磁珠、和终浓度为500～1000U/ml的rhIL‑2，刺激培养6～7天诱导结束，培养过程中每2～3天补加一次rhIL‑2；S4、磁场去除抗CD3/CD28的磁珠，计数获得的活细胞量，取部分诱导后的T细胞进行表型和纯度的鉴定；S5、将剩余诱导后的T细胞重悬于含5～10％人血清的AIM‑V CTS培养基，加入终浓度为50～200U/ml的rhIL‑2，培养1～2天以静息诱导后的T细胞，分选活细胞；S6、取部分步骤S5获得的活细胞进行混合淋巴细胞培养，其余细胞用含人血清白蛋白的生理盐水重悬。