[发明专利]一种全血DNA快速提取方法有效
| 申请号： | 201710355571.0 | 申请日： | 2017-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN107058295B | 公开（公告）日： | 2020-07-28 |
| 发明（设计）人： | 汪德鹏;陶江明;陈逢;张笋;郭启明;王圆;黄萌;汤环宇 | 申请（专利权）人： | 武汉未来组生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 武汉河山金堂专利事务所(普通合伙) 42212 | 代理人： | 胡清堂 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市东湖开发区高新大道*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种全血DNA快速提取方法，步骤包括：S1、将血液样本高速离心后去掉上清液，保留沉淀，加入裂解液后混匀至澄清状态，置于50～60℃水浴40‑60min，冷却后采用有机溶剂抽提，离心后取上清液；S2、向上清液中加入异丙醇和NaAc，混匀后收集沉淀，清洗沉淀后晾干；S3、向沉淀中加入TEN缓冲液和核糖核酸酶，混匀后温育30min，再加入含有蛋白酶K的TEN缓冲液，混匀，水浴30min，冷却后离心，取上清液纯化得到纯净DNA。该方法对样本的处理量大，先通过高速离心去除大部分位于上清液的红细胞，再将沉淀的血细胞(白细胞)用自配的全细胞裂解液一步裂解血细胞，从血液中快速大量的得到适于三代测序的DNA。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 dna 快速 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤包括：S1、将血液样本在13000～16000rpm转速下离心后去掉上清液，保留沉淀，加入裂解液后混匀至澄清状态，置于50～60℃水浴40‑60min，冷却后采用有机溶剂抽提，离心后取上清液；所述裂解液组份包括：0.8～1.2M盐酸胍；pH8.0～8.5、30～100mM Tris‑Cl；pH8.0～8.5、30～100mM EDTA，体积百分比4～8％Tween‑20，体积百分比0.3～1％Triton X‑100，质量体积比0.3～1％SDS和0.3～1mg/ml蛋白酶K；S2、向步骤S1所得上清液中加入异丙醇和NaAc，混匀后收集沉淀，清洗沉淀后晾干；S3、向步骤S2所得晾干的沉淀中加入TEN缓冲液和核糖核酸酶，混匀后置于37℃温育30min，再加入含有蛋白酶K的TEN缓冲液，混匀，置于50～60℃下30min，冷却后离心，取上清液纯化得到纯净DNA。
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