[发明专利]一种全血DNA快速提取方法

权利要求书

1.一种全血DNA快速提取方法，其特征在于：所述方法用于三代测序DNA的提取，步骤包括：

S1、将血液样本在13000～16000rpm转速下离心后去掉上清液，保留沉淀，加入裂解液后混匀至澄清状态，置于50～60℃水浴40-60min，冷却后采用有机溶剂抽提，离心后取上清液；所述裂解液组份包括：0.8～1.2M盐酸胍；pH8.0～8.5、30～100mM Tris-Cl；pH8.0～8.5、30～100mM EDTA，体积百分比4～8％Tween-20，体积百分比0.3～1％Triton X-100，质量体积比0.3～1％SDS和0.3～1mg/ml蛋白酶K；

S2、向步骤S1所得上清液中加入异丙醇和NaAc，混匀后收集沉淀，清洗沉淀后晾干；

S3、向步骤S2所得晾干的沉淀中加入TEN缓冲液和核糖核酸酶，混匀后置于37℃温育30min，再加入含有蛋白酶K的TEN缓冲液，混匀，置于50～60℃下30min，冷却后离心，取上清液纯化得到纯净DNA；

步骤S1中，所述裂解液添加量为血液样本体积的1.5～2.5倍，且裂解液预热至20～40℃后再添加至沉淀中；所述抽提次数为1次，所述离心时长8～15min，温度4～16℃。

2.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S3所述TEN缓冲液组份为：pH8.0～8.5、50～100mM Tris；pH8.0～8.5、50～100mM EDTA；1～1.5M NaCl。

3.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S1所述有机溶剂为氯仿异戊醇混合液，所述氯仿异戊醇体积比为23～25:1。

4.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S1中，所述水浴过程中每5～10min混匀1次。

5.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S2所述异丙醇用量为上清液体积的0.7～1倍，所述NaAc用量为上清液体积的0.1倍。

6.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S3所述含有蛋白酶K的TEN缓冲液稀释5～10倍使用，蛋白酶K的浓度为0.5～1mg/mL。

7.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S3所述上清液纯化采用磁珠纯化，磁珠用比为0.5～1倍待纯化样品体积。