[发明专利]一种全血DNA快速提取方法

说明书

本发明提供了一种全血DNA快速提取方法，步骤包括：S1、将血液样本高速离心后去掉上清液，保留沉淀，加入裂解液后混匀至澄清状态，置于50～60℃水浴40‑60min，冷却后采用有机溶剂抽提，离心后取上清液；S2、向上清液中加入异丙醇和NaAc，混匀后收集沉淀，清洗沉淀后晾干；S3、向沉淀中加入TEN缓冲液和核糖核酸酶，混匀后温育30min，再加入含有蛋白酶K的TEN缓冲液，混匀，水浴30min，冷却后离心，取上清液纯化得到纯净DNA。该方法对样本的处理量大，先通过高速离心去除大部分位于上清液的红细胞，再将沉淀的血细胞(白细胞)用自配的全细胞裂解液一步裂解血细胞，从血液中快速大量的得到适于三代测序的DNA。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及一种提取动物基因组DNA的方法，具体涉及一种用于三代测序的大量全血DNA快速提取方法。

背景技术

核酸测序技术如今已成为生物学研究领域的强大助手，第二代高通量测序技术的应用已取得诸多可喜可贺的成果，但技术原理决定了二代测序存在诸多弊端，如测序读长短、反复PCR扩增造成的扩增偏好性、难以覆盖高GC含量和重复序列区域等。而第三代高通量测序技术的出现，可以完美解决这些问题，其测序读长10～60kb甚至更长，无PCR扩增过程无GC偏向性等，在基因组的组装上对比二代有无与伦比的优势，也因为如此，三代测序对起始DNA样品的要求极高，尤其是在总量(至少8ug/cell)、纯度(A260/280＝1.8～2.0；A260/230＝2.0～2.2等)和完整度(片段大小在10kb以上)上。

DNA提取是分子生物学的基本实验，涉及了基因克隆、基因序列分析、基因重组和基因治疗，以及遗传育种等技术领域。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，提取DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。

大量血液提取流程一般是是先裂解红细胞收集有核血细胞沉淀(主要是白细胞)，或裂解所有细胞膜收集细胞核沉淀(主要是白细胞核)用于DNA提取，这一步骤可去掉血液绝大部分杂质且提高血细胞裂解效率，从而提高血液DNA的得率和纯度。

但此步骤的存在，首先是人力、物力和时间成本的增加；其次血液量越大，操作越复杂；第三是增加多次清洗和离心，血液DNA完整度受影响从而难以满足三代测序要求。

发明内容

鉴于此，本发明为了解决现有从血液中提取DNA存在的工艺繁琐、成本高耗时长、不适应三代测序的问题，采用对大量全血进行高速离心处理，得到血细胞，再用特殊配制的全细胞裂解液一步裂解血细胞，得到的一种适于三代测序的从血液中快速大量提取基因组DNA的方法，该方法最快可在3.5h内拿到合格DNA。

本发明提供了一种全血DNA快速提取方法，步骤包括：

S1、将血液样本在13000～16000rpm转速下离心后去掉上清液，保留沉淀，加入裂解液后混匀至澄清状态，置于50～60℃水浴40-60min，冷却后采用有机溶剂抽提，离心后取上清液；所述裂解液组份包括：0.8～1.2M盐酸胍；pH8.0～8.5、30～100mM Tris-Cl；pH8.0～8.5、30～100mM EDTA，体积百分比4～8％Tween-20，体积百分比0.3～1％Triton X-100，质量体积比0.3～1％SDS和0.3～1mg/ml蛋白酶K；

S2、向步骤S1所得上清液中加入异丙醇和NaAc，混匀后收集沉淀，清洗沉淀后晾干；

S3、向步骤S2所得晾干的沉淀中加入TEN缓冲液和核糖核酸酶，混匀后置于37℃温育30min，再加入含有蛋白酶K的TEN缓冲液，混匀，置于50～60℃下30min，冷却后离心，取上清液纯化得到纯净DNA。

本发明的有益效果是：