[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型的构建方法和应用

摘要

一种基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型的构建方法和应用，设计高效的识别特定基因组PAM区域的sgRNA序列；并在sgRNA序列基础上设计Donor DNA；将Donor DNA，sgRNA和Cas9 mRNA混合物对受精卵原核注射，胚胎移植，品系基因鉴定，得到founder鼠，并克隆测序，确认最终得到遗传性小鼠突变模型。本发明将可以对提高人工辅助生殖技术，防治女性不孕不育和女性生殖相关疾病，以及研制新型有效的女性避孕药物都具有重要参考价值，对促进我国乃至全球女性的生殖健康具有重大意义。

主权项

一种基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型的构建方法，其特征包括以下步骤：第1步：设计高效的识别特定基因组PAM区域的sgRNA序列，所述sgRNA序列如SEQ ID NO.1所示；并在sgRNA序列基础上设计Donor DNA，所述Donor DNA序列SEQ ID NO.2所示；第2步：将Donor DNA，sgRNA和Cas9 mRNA混合物对受精卵原核注射，胚胎移植，品系基因鉴定，得到founder鼠，并克隆测序，确认最终得到的MARF1‑D272A点突变的遗传性小鼠突变模型。