[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型的构建方法和应用有效
| 申请号： | 201710355368.3 | 申请日： | 2017-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN107043787B | 公开（公告）日： | 2017-12-26 |
| 发明（设计）人： | 苏友强;曹广义;李明哲;王昊;时兰英 | 申请（专利权）人： | 南京医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;A01K67/027;A61K49/00 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司32200 | 代理人： | 唐循文 |
| 地址： | 211166 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 crispr cas9 获得 marf1 定点 突变 小鼠 模型 构建 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型的构建方法，其特征包括以下步骤：
第1步：设计高效的识别特定基因组PAM区域的sgRNA序列，所述sgRNA序列如SEQ ID NO.1所示；并在sgRNA序列基础上设计Donor DNA，所述Donor DNA序列SEQ ID NO.2所示；
第2步：将Donor DNA，sgRNA和Cas9 mRNA混合物对受精卵原核注射，胚胎移植，品系基因鉴定，得到founder鼠，并克隆测序，确认最终得到的MARF1-D272A点突变的遗传性小鼠突变模型。
2.权利要求1 所述构建方法获得的基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型在筛选避孕药物中的应用。
3.权利要求1 所述构建方法获得的基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型在筛选防治女性不孕不育药物中的应用。
4.获得MARF1定点突变小鼠模型的试剂盒，其特征在于含有SEQ ID NO.2所示的Donor DNA序列和如SEQ ID NO.1所示的sgRNA。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于还含有Cas9 mRNA。
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