[发明专利]带鱼抗氧化肽分离纯化方法

摘要

本发明提供了一种带鱼抗氧化肽分离纯化方法，操作步骤为1）预处理；2）酶解；3）超滤；4）QFF阴离子交换层析；5）凝胶色谱层析；6）高效液相色谱层析。有益效果为QFF阴离子交换层析，在QFF洗脱中增加了Tris‑HCl缓冲液和硼酸钠，有效地提高了蛋白的挂柱率，避免了部分蛋白在未加NaCl的时候就被洗脱下来，避免了活性蛋白的浪费，提高了活性蛋白的提取率；洗脱速度快，节约能源，降低人力和时间成本，有效保持活性肽的品质；与最初的酶解液相比，最后得到的活性肽的DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、还原能力和超氧阴离子清除能力大大提高。

主权项

带鱼抗氧化肽分离纯化方法，其特征在于以下步骤：1）预处理：将带鱼去头、去皮、去内脏，用清水冲洗干净，剪成小块，在去腥液中浸泡去腥，脱脂；2）酶解：采用木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶双步酶解，过滤得到带鱼抗氧化活性肽酶解液；3）超滤：将步骤2得到的酶解液超滤，得到滤过液，干燥；4）QFF阴离子交换层析：在QFF中加入超纯水，抽气，装柱，平衡，用Tris缓冲液和NaCl溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，检测吸光度，干燥；5）凝胶色谱层析：用蒸馏水浸泡凝胶，抽真空，装柱，平衡，用超纯水作为流动相，继续纯化分离QFF纯化后的活性肽粉末，收集洗脱液，检测吸光度，干燥；6）高效液相色谱层析：将凝胶色谱层析纯化分离后的活性肽粉末采用高效液相色谱仪继续分离纯化，用乙腈和纯水进行梯度洗脱，收集洗脱液，旋蒸得到高纯度带鱼抗氧化肽。