[发明专利]重组大肠杆菌发酵产物中L-哌啶酸的萃取分离方法

摘要

本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种重组大肠杆菌发酵产物中L‑哌啶酸的萃取分离方法。本发明以全细胞催化制备L‑哌啶酸的发酵液为原料，经调节pH值，萃取体系萃取，分离，反萃取，沉淀结晶，最后得到哌啶酸晶体。该方法用三辛胺‑正辛醇‑三磷酸丁酯作为反应萃取体系，解决了L‑哌啶酸在水溶液中溶解度大，不易提纯分离的难题；该方法专一性强，残留杂质少，具有反应条件温和，制备步骤简单，具有工业利用价值等特点。采用本方法制得的哌啶酸晶体有杂质少，为纯品，非钠钾盐，且色素吸附少的优点，此产物可用作制备罗哌卡因等药物的中间体，广泛应用于医药、化工领域。

主权项

1.重组大肠杆菌发酵产物中L‑哌啶酸的萃取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：1)待分离样品处理：取发酵原液，加入吸附剂充分混匀后加热搅拌，再经滤纸、硅藻土和滤膜过滤，得澄清溶液；所述发酵原液中L‑哌啶甲酸浓度为10～60g/L，pH值为2～10；所述发酵原液中含有锌、钾、钠、铵、铁、铜、镁阳离子，含有磷酸根、硫酸根、氯离子阴离子，还含有葡萄糖、赖氨酸、柠檬酸有机成分；2)反应萃取：取步骤1)所述的澄清溶液调节pH值至7～10，用三辛胺‑正辛醇‑三磷酸丁酯的反应萃取体系溶液与澄清溶液混合后搅拌萃取；所述反应萃取体系溶液中的三辛胺、正辛醇和三磷酸丁酯的摩尔比为1：1：1～1：3：2；3)反萃取：将步骤2)中搅拌萃取后的溶液进行离心操作，取上清液，在上清液中加入等体积的水介质混匀后搅拌，搅拌结束后，取下层水相，得L‑哌啶酸水溶液；4)溶析结晶：将步骤3)所述L‑哌啶酸水溶液调节pH值至6.0‑6.5，加入有机溶剂进行溶析，析出针状晶体L‑哌啶酸。