[发明专利]一种实现大肠杆菌基因无痕同源重组的方法有效
| 申请号： | 201610039395.5 | 申请日： | 2016-01-21 |
| 公开（公告）号： | CN105505974B | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 黄磊;姜灵轩;徐志南;蔡谨 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/72 | 分类号： | C12N15/72 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 邱启旺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种大肠杆菌基因无痕同源重组的方法，该方法基于Lac阻遏系统和抗性筛选实现；通过构建包含lac操纵序列控制的抗性操纵子的大肠杆菌重组菌和包含正负筛选标记的无痕重组工具基因串，建立了一种大肠杆菌无痕同源重组的方法，可实现目的基因对大肠杆菌染色体上的靶位点进行无痕重组的目标，对大肠杆菌染色体进行基因编辑研究工作具有重要的意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 实现 大肠杆菌 基因 同源 重组 方法 | ||
【主权项】：
1.一种实现大肠杆菌基因无痕同源重组的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将抗性基因A与lac操纵序列相连，得到操纵子，所述抗性基因A为可用于大肠杆菌抗性![]()
筛选的基因；（2）将操纵子同源重组替换大肠杆菌染色体上的野生型lacI基因及其启动子；（3）用无痕重组工具基因串对步骤2同源重组替换后的大肠杆菌的靶位点序列进行同源替换；所述无痕重组工具基因串由正筛选标记抗性基因B与负筛选标记lacI阻遏物基因反向连接而成，抗性基因B为可用于大肠杆菌抗性![]()
筛选的基因；负筛选标记lacI阻遏物基因包含placIq启动子；（4）利用抗性![]()
对步骤3同源替换后的大肠杆菌进行筛选，获得重组成功的重组子；（5）用目标DNA片段同源替换步骤4所得到的阳性大肠杆菌重组子中的工具基因串，利用抗性![]()
对目标DNA片段同源替换后的大肠杆菌进行筛选，得到重组成功的无痕同源重组子。
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