[发明专利]一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法有效
申请号: | 201710242772.X | 申请日: | 2017-04-14 |
公开(公告)号: | CN107129531B | 公开(公告)日: | 2020-09-11 |
发明(设计)人: | 张晨光;王宏伟;陈磊;汪铖;孙金星;孔祥林;汪军 | 申请(专利权)人: | 江苏恒瑞医药股份有限公司 |
主分类号: | C07K14/535 | 分类号: | C07K14/535;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18 |
代理公司: | 北京戈程知识产权代理有限公司 11314 | 代理人: | 程伟 |
地址: | 222047 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明涉及一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法。具体而言,本发明优化了阳离子交换色谱分离纯化PEG‑G‑CSF,并进行适当的缓冲液置换制备PEG‑G‑CSF原液的方法,通过一步柱层析纯化并置换缓冲液即可获得HPLC、电泳纯度均在98%以上的PEG‑G‑CSF。本发明纯化工艺不仅简化了工艺路线,节省了生产时间,并且蛋白回收率高,获得的蛋白原液纯度高,加入适当的药用辅料即可制备成药物制剂,十分适合大规模工业化放大生产。 | ||
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【主权项】:
一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法,包括:将PEG‑G‑CSF修饰产物上样至Sepharose HP阳离子交换层析柱进行层析纯化,先采用缓冲液进行杂质洗脱,再采用缓冲液A液与B液进行线性梯度洗脱,收集样品峰。
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- 孙黎;蔡慧丽;何艳;杨美花;裴广强;林崧;余东新 - 厦门特宝生物工程股份有限公司
- 2010-05-07 - 2010-09-15 - C07K14/535
- 本发明公开了一种重组人粒细胞刺激因子的纯化方法,采用的大肠杆菌表达重组人粒细胞刺激因子rhG-CSF为包涵体形式,包括下述纯化步骤:(1)采用优化的包涵体洗涤液配方进行洗涤,获得高纯度的包涵体;(2)对洗涤后的包涵体样品进行超滤复性;(3)复性后样品通过Capto ViralQ柱层析;(4)然后通过Superdex 75凝胶过滤柱层析,得到纯化后的重组人粒细胞刺激因子rhG-CSF原液。本发明具有工艺简便快速,步骤少,收率高,纯度高,样品各项指标均符合欧洲药典要求,在兼顾环保的同时,提高药品的安全性、可控性和有效性的特点。
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