[发明专利]一种利用磁性固定化碱性蛋白酶提取虾壳蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种利用磁性固定化碱性蛋白酶提取虾壳蛋白的方法，其步骤是1、制备磁性固定化碱性蛋白酶将磁性壳聚糖微球加入硼砂缓冲液中，然后加入碱性蛋白酶，在0‑10℃下反应2‑5h，再加入戊二醛，在0‑10℃下反应2‑5h，过滤，洗涤，干燥，得到磁性固定化碱性蛋白酶；2、提取虾壳中的蛋白2.1、将虾壳粉加入到乙酸溶液中，在55‑75℃下反应1‑5h，过滤，向滤渣中加入碱性溶液至呈中性，过滤，洗涤，干燥，得改性虾壳粉；2.3、测定改性虾壳粉中虾壳蛋白的含量；2.4、将改性虾壳粉加入到硼砂缓冲液中，加入磁性固定化碱性蛋白酶，在45‑60℃下酶解1‑5小时，过滤，将滤液冷冻干燥，得到虾壳蛋白粉。该方法简单易操作，稳定性好，水解蛋白效果好，所需成本低。

主权项

一种利用磁性固定化碱性蛋白酶提取虾壳蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：1.1、制备磁性固定化碱性蛋白酶：1.1.1、将磁性壳聚糖微球加入pH＝9‑12的硼砂缓冲液中，再加入碱性蛋白酶，磁性壳聚糖微球、碱性蛋白酶和硼砂缓冲液的比例为1mg:100‑400U:0.1‑1ml，在0‑10℃下反应2‑5h，得到混合产物；1.1.2、向混合产物中加入戊二醛，使戊二醛的终浓度为0.005‑0.01g/ml，在0‑10℃下反应2‑5h，过滤，将滤渣用硼砂缓冲液洗涤，干燥，得到磁性固定化碱性蛋白酶；1.2、提取虾壳中的蛋白：1.2.1、将虾壳粉加入到浓度为50‑90g/L乙酸溶液中，虾壳粉与乙酸溶液的质量体积比为1g:6‑14ml，在55‑75℃下反应1‑5h，得混合液；1.2.2、将混合液过滤，向滤渣中加入碱性溶液至体系呈中性，过滤，再用蒸馏水洗涤滤渣，干燥，得改性虾壳粉；1.2.3、测定改性虾壳粉中虾壳蛋白的含量；1.2.4、将改性虾壳粉加入到pH为9‑12的硼砂缓冲液中，接着加入磁性固定化碱性蛋白酶，磁性固定化碱性蛋白酶与虾壳蛋白的比例为10‑20U:1mg，在温度为45‑60℃下搅拌酶解1‑5小时，酶解结束后，用吸铁石分离出磁性固定化碱性蛋白酶，将分离出的磁性固定化碱性蛋白酶洗涤后保存备用，再将所得的酶解液过滤，将滤液冷冻干燥，得到虾壳蛋白多肽，即为虾壳蛋白粉。