[发明专利]一种鸡传染性喉气管炎病毒的实时荧光定量PCR检测方法在审
| 申请号： | 201710184165.2 | 申请日： | 2017-03-24 |
| 公开（公告）号： | CN107099617A | 公开（公告）日： | 2017-08-29 |
| 发明（设计）人： | 张铁;陈谏;王春光;孟凡国;张广群;蒋桂娥;贾书芬;贾泽;张石磊 | 申请（专利权）人： | 河北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 石家庄国为知识产权事务所13120 | 代理人： | 申超平 |
| 地址： | 071001 *** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鸡传染性喉气管炎病毒的实时荧光定量PCR（real‑time PCR）检测方法，涉及分子生物学领域，本发明针对鸡传染性喉气管炎病毒的gB基因设计并合成了一对引物PF5′‑CAATGGCTTCGGAGAAAGAG‑3′和PR5′‑GGCAATCCTGATCCCATCTA‑3′，经PCR扩增和标准品制备，建立检测鸡传染性喉气管炎病毒的荧光定量PCR方法，具有特异性更强，灵敏度高，操作简单快速，对PCR进程进行实时检测，对每一个循环进行定量和定性分析，并可利用建立的鸡传染性喉气管炎病毒的荧光定量PCR方法检测出组织内的病毒含量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 传染性 气管炎 病毒 实时 荧光 定量 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种鸡传染性喉气管炎病毒的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于包括如下步骤：（1）引物设计：针对鸡传染性喉气管炎病毒的gB基因设计并合成了一对引物PF和PR，上游引物PF为5′‑ CAATGGCTTCGGAGAAAGAG‑3′，下游引物PR为5′‑ GGCAATCCTGATCCCATCTA‑3′；（2）传统PCR扩增：首先对提取出对鸡传染性喉气管炎病毒DNA进行传统PCR扩增，通过预变性、变性、退火、延伸步骤，快速特异地在体外扩增出目的DNA片段；（3）阳性标准品制作：将目的DNA片段连接入载体，转入感受态细胞，构建重组质粒作为阳性标准品；（4）荧光定量PCR检测：用梯度稀释的质粒标准品进行real‑time PCR扩增 ，得到扩增曲线，并以拷贝数为x轴，以Ct值为y轴，构建real‑time PCR标准曲线，建立检测鸡传染性喉气管炎病毒的荧光定量PCR方法；（5）对该引物进行了特异性和灵敏度检测。
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