[发明专利]淫羊藿苷与透明质酸的结合物及其制备方法和应用

摘要

本发明提供一种淫羊藿苷与透明质酸的结合物及其制备方法和应用，其用于制备骨软骨疾病治疗的药品，尤其是关节腔注射剂，克服了单一透明质酸治疗的局限性，增加适用范围，降低其不良反应；借助淫羊藿苷对软骨细胞的药理作用，增强其对软骨表面的覆盖和保护作用；作用于滑膜细胞，可以促进自体高分子透明质酸的合成，从而达到营养软骨、润滑关节腔、缓解疼痛、改善患者日常活动及关节活动范围等目的；作用于软骨细胞，可以增强软骨细胞活性，促进软骨细胞二型胶原及粘多糖等活性物质的分泌，共同作用起到营养、润滑、再生、功能重建等作用。扭转对中药注射剂的认识，可大大减小其不良反应，增大了透明质酸及中药注射剂的疗效和应用范围。

主权项

1.淫羊藿苷与透明质酸的结合物，其分子式为：通过下述反应式进行：(1)(2)(3)(4)具体步骤为：步骤1：甘氨酸的氨基保护：把2mmol甘氨酸(Gly)溶解在20mL NaHCO3溶液，其质量分数为1.68％，室温下搅拌1‑2h，同时，将0.45g二碳酸二叔丁基酯溶解在2mL二氧六环中，而后，在冰浴中不断搅拌的条件下，把二碳酸二叔丁基酯溶液缓慢滴加至Gly的溶液中，控制滴速在10分钟内滴加完毕后，室温反应20h；用0.01M HCl调节上述反应后的溶液的pH至中性，用旋转蒸发仪除去溶剂，而后将余下固体用二氯甲烷(DCM)溶解，并除去不溶物NaCl；将DCM中溶解的反应产物滴加至10倍体积的冷乙醚中沉淀，通过抽滤收集固体产物，并用冷乙醚多次洗涤此固体产物，最后放置于真空干燥箱中干燥，即可得到叔丁氧羰基甘氨酸叔丁酯；步骤2淫羊藿苷与叔丁氧羰基甘氨酸叔丁酯的脱水缩合反应将淫羊藿苷加入到四氢呋喃(THF)和吡啶(pyridine)的混合溶液中，不断搅拌至完全溶解，加入一定量的叔丁氧羰基甘氨酸叔丁酯，剧烈搅拌1h，而后缓慢加入二环己基碳二亚胺(DCC)和二甲基氨基吡啶(DMAP)的四氢呋喃溶液，室温下搅拌反应24h，而后，加入20mL去离子水，抽滤，洗涤，尽量除尽不溶物，通过旋蒸使溶液浓缩，再将浓缩后溶液沉淀在水中，然后将沉淀溶解于THF和吡啶的混合溶液中，加水，冷冻过夜，将不溶物除去，浓缩，加水析出沉淀,如此反复三次，得产物；步骤3脱除叔丁氧羰基的保护取第二步产物5g，加入至9mL三氟乙酸(TFA)和10mL二氯甲烷(DCM)的混合溶液中，室温下搅拌1‑2h，产物旋蒸除去DCM，所得固体用乙酸乙酯溶解，用5％碳酸钠(NaCO3)洗涤至pH＝8‑9，而后除去溶剂可以得到第三步反应产物氨基淫羊藿苷；步骤4氨基淫羊藿苷与透明质酸的偶联透明质酸加入至蒸馏水中，而后向其中缓慢滴加氨基淫羊藿苷，淫羊藿苷的氨基与透明质酸的羧基摩尔比为1:1‑1：n，并向其中加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐，浓度为10mg/mL和N‑羟基琥珀酰亚胺，浓度为10mg/mL，并将溶液pH调节至4.5，而后室温下搅拌反应20min，再将pH调节至5.5，室温下搅拌24h，而后利用柱层析分离即可得到最终产物，即淫羊藿苷与透明质酸的结合物。