[发明专利]淫羊藿苷与透明质酸的结合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.淫羊藿苷与透明质酸的结合物，其分子式为：

通过下述反应式进行：

(1)

(2)

(3)

(4)

具体步骤为：

步骤1：甘氨酸的氨基保护：

把2mmol甘氨酸(Gly)溶解在20mL NaHCO3溶液，其质量分数为1.68％，室温下搅拌1-2h，同时，将0.45g二碳酸二叔丁基酯溶解在2mL二氧六环中，而后，在冰浴中不断搅拌的条件下，把二碳酸二叔丁基酯溶液缓慢滴加至Gly的溶液中，控制滴速在10分钟内滴加完毕后，室温反应20h；

用0.01M HCl调节上述反应后的溶液的pH至中性，用旋转蒸发仪除去溶剂，而后将余下固体用二氯甲烷(DCM)溶解，并除去不溶物NaCl；将DCM中溶解的反应产物滴加至10倍体积的冷乙醚中沉淀，通过抽滤收集固体产物，并用冷乙醚多次洗涤此固体产物，最后放置于真空干燥箱中干燥，即可得到叔丁氧羰基甘氨酸叔丁酯；

步骤2淫羊藿苷与叔丁氧羰基甘氨酸叔丁酯的脱水缩合反应

将淫羊藿苷加入到四氢呋喃(THF)和吡啶(pyridine)的混合溶液中，不断搅拌至完全溶解，加入一定量的叔丁氧羰基甘氨酸叔丁酯，剧烈搅拌1h，而后缓慢加入二环己基碳二亚胺(DCC)和二甲基氨基吡啶(DMAP)的四氢呋喃溶液，室温下搅拌反应24h，而后，加入20mL去离子水，抽滤，洗涤，尽量除尽不溶物，通过旋蒸使溶液浓缩，再将浓缩后溶液沉淀在水中，然后将沉淀溶解于THF和吡啶的混合溶液中，加水，冷冻过夜，将不溶物除去，浓缩，加水析出沉淀,如此反复三次，得产物；

步骤3脱除叔丁氧羰基的保护

取第二步产物5g，加入至9mL三氟乙酸(TFA)和10mL二氯甲烷(DCM)的混合溶液中，室温下搅拌1-2h，产物旋蒸除去DCM，所得固体用乙酸乙酯溶解，用5％碳酸钠(NaCO3)洗涤至pH＝8-9，而后除去溶剂可以得到第三步反应产物氨基淫羊藿苷；

步骤4氨基淫羊藿苷与透明质酸的偶联

透明质酸加入至蒸馏水中，而后向其中缓慢滴加氨基淫羊藿苷，淫羊藿苷的氨基与透明质酸的羧基摩尔比为1:1-1：n，并向其中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，浓度为10mg/mL和N-羟基琥珀酰亚胺，浓度为10mg/mL，并将溶液pH调节至4.5，而后室温下搅拌反应20min，再将pH调节至5.5，室温下搅拌24h，而后利用柱层析分离即可得到最终产物，即淫羊藿苷与透明质酸的结合物。

2.根据权利要求1所述的结合物用于制备骨、软骨疾病药品中的应用，其特征在于：用于制备关节腔注射剂，用于膝骨关节炎时，膝关节腔内注射；用于肩周炎时，肩关节腔或肩峰下滑囊内注射，用于滑膜炎、滑囊炎时，滑囊直接注射；一次2.5ml，一周1次，5周为一疗程。