[发明专利]一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法

摘要

本发明提供一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法，采用改进的单宁沉淀法分离提取经产纤维素酶微生物发酵产生的纤维素酶,并用真空冷冻干燥法制备成粉末状纤维素酶产品,使纤维素酶的回收率能够达到90‑95％,具有用时短，能耗小，操作简单，纤维素酶收率高的优点。本发明克服了分离提取纤维素酶阶段在整个木质纤维素制乙醇工艺中成本过高，操作复杂等难题,适用于从海洋黑曲霉中回收纤维素酶的工业化大规模制备。本发明选用的海洋黑曲霉具有抗盐性、酶系丰富、表达量高、分泌能力强的特点。本发明方法设计合理，操作简单可行，投入设备成本低，收率高，适用于大规模分离提取纤维素酶的工业化生产。

主权项

一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法,，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)发酵液澄清：将海洋微生物固态发酵7‑8天后生产的固态发酵液进行过滤、离心，得到发酵澄清液；所述海洋微生物为海洋黑曲霉菌，Aspergillus sp.ZJUBE2010,保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCC NO.M2010132，保藏日期：2010年6月2日；(2)单宁沉淀：将上述发酵澄清液加入搅拌罐中,以一定的转搅拌一定时间,将一定量的单宁溶液加入搅拌罐中的发酵澄清液中,并持续搅拌一定时间,然后静置1‑2h，进行纤维素酶的沉淀；(3)沉淀收集：将经过单宁沉淀的发酵液以一定的进行离心，上清液去掉，收集沉淀；(4)沉淀复溶：将上述沉淀用一定体积的浓度为20mg/ml的聚乙二醇溶液复溶，并持续搅拌一定时间，然后静置1‑2h，进行复溶；(5)产品收集：将上述溶液，置于离心机中以一定的转速离心一段时间，上清液即为浓缩之后的纤维素酶液，将浓缩液置于真空冷冻干燥机中干燥制得粉末状纤维素酶产品。