[发明专利]一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法

权利要求书

1.一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法,，其特征在于，通过以下步骤实现：

(1)发酵液澄清：将海洋微生物固态发酵7-8天后生产的固态发酵液进行过滤、离心，得到发酵澄清液；所述海洋微生物为海洋黑曲霉菌，Aspergillus sp.ZJUBE2010,保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCC NO.M2010132，保藏日期：2010年6月2日；

(2)单宁沉淀：将上述发酵澄清液加入搅拌罐中,以一定的转搅拌一定时间,将一定量的单宁溶液加入搅拌罐中的发酵澄清液中,并持续搅拌一定时间,然后静置1-2h，进行纤维素酶的沉淀；

(3)沉淀收集：将经过单宁沉淀的发酵液以一定的进行离心，上清液去掉，收集沉淀；

(4)沉淀复溶：将上述沉淀用一定体积的浓度为20mg/ml的聚乙二醇溶液复溶，并持续搅拌一定时间，然后静置1-2h，进行复溶；

(5)产品收集：将上述溶液，置于离心机中以一定的转速离心一段时间，上清液即为浓缩之后的纤维素酶液，将浓缩液置于真空冷冻干燥机中干燥制得粉末状纤维素酶产品。

2.根据权利要求1所述的所述的一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法,其特征在于，对步骤(1)中得到的所述发酵澄清液和步骤(4)中经单宁沉淀聚乙二醇解析之后收集到的纤维素酶液分别用滤纸酶活力测定方法测定其纤维素酶活力。

3.根据权利要求1所述的一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法,，其特征在于，所述步骤(2)中单宁的用量按照10g/L的用量向发酵澄清液中添加。

4.根据权利要求1所述的一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法，其特征在于，所述步骤(2)和步骤(4)中，搅拌的转速为80r/min，搅拌时间为10min。

5.根据权利要求1所述的一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法,，其特征在于，所述步骤(3)和步骤(5)中，离心的转速为4000r/min，离心时间为20min。

6.根据权利要求1所述的一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，聚乙二醇溶液的浓度为20g/L，溶质为分子量为6000的PEG，溶剂为自然水。

7.根据权利要求1所述的一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法,，其特征在于，所述步骤(4)中，聚乙二醇溶液的复溶体积根据其原发酵液体积的1/10而定。

8.根据权利要求1所述的一种从海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶的方法，其特征在于，所述步骤(5)中真空冷冻干燥的条件：真空度为9-19Pa，温度为-50℃～-80℃，抽真空12-36h直至成粉末状无水分时为止。

9.根据权利要求1-8任一所述的方法在海洋黑曲霉发酵液中回收纤维素酶中的应用。