[发明专利]用多分子标签检测DNA变异水平的方法

摘要

本发明涉及一种用多分子标签检测DNA变异水平的方法，在D5中插入第一DNA分子标签N1，得到第一单链DNA分子，其中N1序列长度为2‑12bp；在D7中插入第二DNA分子标签N2和第三DNA分子标签N3，得到第二单链DNA分子，N2和N3序列长度分别为2‑12bp、2‑20bp；将上述两条单链分子混合后退火，再进行DNA聚合反应，然后使用限制性内切酶进行酶切，得到含第一粘性末端的DNA接头序列；将待测DNA破碎成DNA短片段，并在其两端加上与第一粘性末端反向互补的第二粘性末端；连接DNA接头序列与DNA短片段，PCR扩增后对其测序，然后与人类参考基因组比对，以判断待测DNA变异水平。

主权项

一种用多分子标签检测DNA变异水平的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在单链DNA分子D5中插入第一DNA分子标签N1，得到如下序列的第一单链DNA分子：5'‑AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACN1ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT‑3'，其中N1序列长度为2‑12bp；(2)在单链DNA分子D7中插入第二DNA分子标签N2和第三DNA分子标签N3，得到如下序列的第二单链DNA分子：5'‑TCTTCTACAGTCAN2AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACN3ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG‑3'，其中N2序列长度为2‑12bp，N3序列长度为2‑20bp；(3)将步骤(1)和(2)中的第一单链DNA分子和第二单链DNA分子混合后发生退火反应，使第一、第二单链DNA分子互补结合，形成Y型DNA分子，然后在DNA聚合酶的作用下与脱氧核糖核苷三磷酸发生DNA聚合反应，使第一单链DNA分子序列的3’端延伸，与第二单链DNA分子的5’端反向互补，然后使用限制性内切酶进行酶切，得到含第一粘性末端的DNA接头序列；(4)将待测DNA破碎成DNA短片段，用DNA聚合酶在所述DNA短片段两端加上第二粘性末端，所述第二粘性末端与所述第一粘性末端反向互补；(5)用DNA连接酶连接步骤(3)得到的DNA接头序列与步骤(4)得到的DNA短片段，然后进行PCR扩增，得到扩增产物；(6)对所述扩增产物进行测序，然后与人类参考基因组进行序列比对，以判断待测DNA变异水平。