[发明专利]核酸甲基化的确定在审
| 申请号： | 201680079795.7 | 申请日： | 2016-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN108495937A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 祖延兵;应仪如 | 申请（专利权）人： | 新加坡科技研究局 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 北京三高永信知识产权代理有限责任公司 11138 | 代理人： | 唐述灿 |
| 地址： | 新加坡*** | 国省代码： | 新加坡;SG |
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| 摘要： | 本发明涉及用于确定样品中靶核酸分子的甲基化状态的方法和试剂盒，其包括：(a)用亚硫酸氢盐处理所述靶核酸；(b)用甲基化特异性引物扩增经处理的靶核酸；(c)使扩增子与甲基化特异性等离子体纳米探针接触；以及(d)基于杂交探针和所述靶核酸的解链温度Tm，确定所述甲基化状态。特别地，等离子体金纳米颗粒共价偶联至吗啉代寡核苷酸探针。本发明还请求保护用于确定Septin 9(SEPT9)基因启动子的甲基化状态的方法和试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | 甲基化状态 靶核酸 等离子体 甲基化特异性 试剂盒 亚硫酸氢盐处理 寡核苷酸探针 靶核酸分子 基因启动子 金纳米颗粒 共价偶联 纳米探针 引物扩增 杂交探针 甲基化 扩增子 核酸 解链 吗啉 | ||
【主权项】：
1.确定样品中靶核酸分子的甲基化状态的方法，其中所述方法包括以下步骤：(a)用亚硫酸氢盐处理所述样品，从而将所述靶核酸分子中未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶；(b)在聚合酶链式反应(PCR)中，使用甲基化特异性引物对，在允许产生PCR扩增产物(扩增子)的这样的扩增条件下，扩增经转化的靶核酸分子的至少一部分，所述部分包含待分析甲基化状态的靶区域；(c)在允许寡核苷酸类似物探针与包含所述靶区域的所述扩增子彼此杂交的条件下，使所述扩增子与甲基化特异性等离子体纳米探针接触，所述等离子体纳米探针包含等离子体纳米颗粒和与其共价偶联的非离子寡核苷酸类似物探针，所述寡核苷酸类似物探针包含与所述靶区域互补的碱基序列，其中如果与所述靶核酸分子杂交，则所述探针产生与未杂交探针的信号可区分的可检测信号；(d)基于对所述纳米探针和所述靶核酸的杂交体的解链温度Tm的测定，来确定所述靶核酸分子的甲基化状态。
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