[发明专利]一种减少扩增偏倚的基因突变检测方法和试剂有效
| 申请号： | 201611262689.0 | 申请日： | 2016-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN106701949B | 公开（公告）日： | 2019-09-17 |
| 发明（设计）人： | 王永利;宋卓;袁梦兮 | 申请（专利权）人： | 人和未来生物科技（长沙）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市高新*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种减少扩增偏倚的基因突变检测方法和试剂，所述方法包括：(a)使用第一步单向引导延伸引物对含有目标区域DNA的接头连接产物进行第一步单向引导延伸，然后进行PCR扩增；(b)使用第二步单向引导延伸引物对步骤(a)的产物进行第二步单向引导延伸，然后进行PCR扩增；(c)对步骤(b)的产物进行变性，然后在适于已变性的步骤(b)的产物退火的温度下，用双链特异性核酸酶处理步骤(b)的产物；(d)使用第二通用引物和第三通用引物对(c)的产物进行PCR扩增并测序。本方法能使高丰度DNA含量与低丰度DNA含量接近，达到减少扩增偏倚的目的，实现通过高通量测序技术来低成本精准检测低丰度基因突变的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 扩增 偏倚 基因突变检测 延伸引物 低丰度 变性 双链特异性核酸酶 高通量测序技术 退火 通用引物对 基因突变 接头连接 目标区域 通用引物 低成本 高丰度 延伸 测序 检测 | ||
【主权项】：
1.一种减少扩增偏倚的基因突变检测方法，其特征在于，所述方法包括：（a）使用用于捕获待检测位点或待检测区域的第一步单向引导延伸引物对含有目标区域DNA的接头连接产物进行预定循环数的第一步单向引导延伸，然后使用第一通用引物和第一步单向引导延伸引物进行PCR扩增，其中所述第一通用引物与所述接头连接产物上的接头序列匹配；（b）使用用于捕获待检测位点或区域的第二步单向引导延伸引物对所述步骤（a）的产物进行预定循环数的第二步单向引导延伸，其中所述第二步单向引导延伸引物相比所述第一步单向引导延伸引物在模板上的结合位置距离所述待检测位点或区域更近，然后使用第二通用引物和第二步单向引导延伸引物进行PCR扩增，其中所述第二通用引物与所述接头序列匹配；（c）对所述步骤（b）的产物进行变性，然后在适于已变性的所述步骤（b）的产物退火的温度下，用双链特异性核酸酶处理所述步骤（b）的产物，以减少丰度过高的DNA分子含量，增加丰度低的DNA分子的相对含量；（d）使用第二通用引物和第三通用引物对步骤（c）的产物进行PCR扩增并测序；其中，所述第一步单向引导延伸引物与所述第二步单向引导延伸引物均位于所述待检测位点或待检测区域在所述目标区域DNA的同方向。
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