[发明专利]无血清细胞培养基及高效表达重组蛋白质的方法在审
| 申请号： | 201611137227.6 | 申请日： | 2016-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN108220334A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 郭亚军;寇庚;王延兵;张小萌;徐进;张存超 | 申请（专利权）人： | 上海迈泰君奥生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C07K19/00;C12N5/075 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供一种用于CHO细胞培养的无血清细胞培养基，所述培养基由基础培养基和补充培养基组成，基础培养基中添加胞苷、尿苷、鸟苷、胸苷及腺苷，补充培养基中添加精氨酸、苯丙氨酸及甲硫氨酸。使用所述无血清培养基培养CHO细胞，使其高效表达CD47/PD‑L1双功能融合蛋白，经本发明所述的培养方法培养获得的CD47/PD‑L1双功能融合蛋白，糖型修饰以G0F为主。 | ||
| 搜索关键词： | 无血清细胞培养基 双功能融合蛋白 基础培养基 高效表达 培养基 无血清培养基 培养基组成 重组蛋白质 苯丙氨酸 甲硫氨酸 精氨酸 补充 鸟苷 腺苷 胸苷 修饰 | ||
【主权项】：
1.一种新型CD47/PD‑L1双功能融合蛋白的制备方法，包括以下步骤：a）一种新型抗CD47/PD‑L1双功能融合蛋白：CD47结合部分具有SEQ ID NO: 2的氨基酸序列；PD‑L1结合部分的轻链具有SEQ ID NO: 4的氨基酸序列，重链具有SEQ ID NO: 6的氨基酸序列；b）利用步骤a）所得核苷酸片断构建重组质粒，转染宿主细胞，筛选高表达克隆；c）使用改进的无血清细胞培养基大规模培养，获得抗CD47/PD‑L1双功能融合蛋白，分离纯化；其特征在于，所述的改进的无血清细胞培养基由基础培养基和补充培养基组成，基础培养基中添加胞苷、尿苷、鸟苷、胸苷和腺苷，补充培养基中添加精氨酸、苯丙氨酸及甲硫氨酸。
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