[发明专利]一种非标记均相检测苯甲酸钠的比色法

摘要

一种非标记均相检测苯甲酸钠的比色法。本发明利用聚联乙炔囊泡受到外界扰动由蓝变红的光学特性，将联乙炔单体与苯甲酸半抗原——对氨基苯甲酸相连，制成囊泡探针，光聚合后囊泡显蓝色。该囊泡体系与苯甲酸抗体特异性结合，囊泡显红色，当检测体系中存在游离苯甲酸，囊泡探针由蓝变红的程度收到干扰，降低的程度与苯甲酸含量相关，由此建立了苯甲酸钠的快速检测体系。该法无需特殊仪器，定性测定时仅凭肉眼可视，定量测定时采用常规紫外分光光度计即可；操作简单，非均相测试，无需酶标记；方法灵敏，检测线性范围为0.01ng mL‑1‑100ng mL‑1，食品样品处理仅稀释即可，具有简单、经济、选择性好、灵敏度高等优点。

主权项

1.一种非标记均相检测苯甲酸钠的比色法，由下述步骤组成：(1)制备蓝色囊泡溶液取1mM PCDA的二氯甲烷储液与1mM PCDA‑对氨基苯甲酸储液按照一定比例体积比混合后加1mM DMPC储液，于100mL圆底烧瓶减压旋干后加入超纯水，80℃超声15min，室温放置2h，转移至4℃存放12h后以紫外254nm激发15min，得到蓝色囊泡溶液；(2)制作标准曲线向300μL蓝色囊泡溶液中加入10μL OVA(卵清蛋白)封闭液，10μL苯甲酸钠标准溶液(浓度为0.01ng mL‑1、0.1ng mL‑1、1ng mL‑1、10ng mL‑1、100ng mL‑1、1000ng mL‑1、10000ng mL‑1)，之后加入10μL苯甲酸钠抗体，涡旋振荡混匀，37℃孵育30min，用紫外分光光度计测定上述不同浓度苯甲酸钠标准溶液的紫外吸收光谱，计算CR％值，以浓度为0.01‑10000ng mL‑1苯甲酸钠溶液为横坐标，比色响应值CR％值为纵坐标，由origin8.0软件作图得标准曲线；(3)检测样品溶液中的苯甲酸钠①样品的预处理：样品(酱油/醋)，超纯水稀释100倍，备用；②同上操作：向300μL蓝色囊泡溶液中加入10μL OVA封闭液，10μL样品溶液，涡旋混匀后加入10μL苯甲酸钠抗体，用紫外分光光度计测定上述不同浓度苯甲酸钠标准溶液的紫外光谱，计算CR％值，代入标准曲线求得样品中苯甲酸钠含量。