[发明专利]一种非标记均相检测苯甲酸钠的比色法在审
| 申请号： | 201611135883.2 | 申请日： | 2016-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN108195828A | 公开（公告）日： | 2018-06-22 |
| 发明（设计）人： | 孟萌;李小刚;郗日沫;尹永梅;龙浩;张丽沙;邓川;许坤;刘玮 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | G01N21/78 | 分类号： | G01N21/78;G01N21/33 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300350 天津市津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 苯甲酸 囊泡 苯甲酸钠 检测 比色法 非标记 探针 紫外分光光度计 对氨基苯甲酸 聚联乙炔囊泡 抗体特异性 联乙炔单体 定量测定 定性测定 光学特性 快速检测 食品样品 外界扰动 半抗原 非均相 光聚合 灵敏度 酶标记 稀释 后囊 可视 游离 灵敏 测试 | ||
1.一种非标记均相检测苯甲酸钠的比色法，由下述步骤组成：
(1)制备蓝色囊泡溶液
取1mM PCDA的二氯甲烷储液与1mM PCDA-对氨基苯甲酸储液按照一定比例体积比混合后加1mM DMPC储液，于100mL圆底烧瓶减压旋干后加入超纯水，80℃超声15min，室温放置2h，转移至4℃存放12h后以紫外254nm激发15min，得到蓝色囊泡溶液；
(2)制作标准曲线
向300μL蓝色囊泡溶液中加入10μL OVA(卵清蛋白)封闭液，10μL苯甲酸钠标准溶液(浓度为0.01ng mL-1、0.1ng mL-1、1ng mL-1、10ng mL-1、100ng mL-1、1000ng mL-1、10000ng mL-1)，之后加入10μL苯甲酸钠抗体，涡旋振荡混匀，37℃孵育30min，用紫外分光光度计测定上述不同浓度苯甲酸钠标准溶液的紫外吸收光谱，计算CR％值，以浓度为0.01-10000ng mL-1苯甲酸钠溶液为横坐标，比色响应值CR％值为纵坐标，由origin8.0软件作图得标准曲线；
(3)检测样品溶液中的苯甲酸钠
①样品的预处理：
样品(酱油/醋)，超纯水稀释100倍，备用；
②同上操作：向300μL蓝色囊泡溶液中加入10μL OVA封闭液，10μL样品溶液，涡旋混匀后加入10μL苯甲酸钠抗体，用紫外分光光度计测定上述不同浓度苯甲酸钠标准溶液的紫外光谱，计算CR％值，代入标准曲线求得样品中苯甲酸钠含量。
2.按照权利要求1所述的非标记型均相比色检测苯甲酸钠的方法，其特征在于所述使用PCDA-对氨基苯甲酸作为构建囊泡的关键单体成分，PCDA一种常用的联乙炔单体，为10，12-二十五二炔酸，DMPC为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，用作制备囊泡的磷脂成分，囊泡探针的特征在于：在制备囊泡时，聚联二炔与磷脂的比例为7∶3，旋蒸去除溶剂后，加入等体积蒸馏水，超声分散，用紫外分光光度计测定紫外光谱。
3.按照权利要求1所述的非标记型均相比色检测苯甲酸钠的方法，其特征在于：在制备囊泡时，PCDA与PCDA-对氨基苯甲酸按照一定比例混合，优选6∶4，7∶3，8∶2，9∶1，优选7∶3。
4.根据权利要求1所述的非标记型均相比色检测苯甲酸钠的方法，其特征在于：检测测定样品的紫外吸收强度，计算CR％值，与标准工作曲线相比，计算待检测溶液中苯甲酸钠的含量。
5.根据权利要求1所述的苯甲酸钠的检测方法，其特征在于：所述检测液的吸收波长是蓝色(650nm)或红色(540nm)。
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