[发明专利]利用白酒丢糟制备活性肽的方法

摘要

利用白酒丢糟制备活性肽的方法，包括原料预处理、丢糟蛋白酶解、活性肽的提纯，利用定向酶解技术、3kDa膜超滤制得低分子量、高活性的活性肽，利用凝胶过滤层析、高效液相色谱两步分离技术对活性肽进行高度纯化,该活性肽的ACE抑制活性IC50为1.14 mg/ml；DPPH·清除能力EC50为1.42 mg/ml，ABTS·清除能力EC50为2.56 mg/ml，还原力（A700nm=0.5）为375.48 μg/ml，纯度达92.1%。本发明原料为大曲酒、小曲酒、麸曲酒等白酒丢糟，能进行产业化生产,可操作性强，目标物的分子量小且纯度高，能促进我国酿酒行业副产物资源的开发与利用，实现对活性肽的高效制备。

主权项

利用白酒丢糟制备活性肽的方法，其特征在于包括以下步骤：1）原料预处理：取丢糟加8倍体积水充分搅拌5 min，用纱布滤去上层悬浮的稻壳，剩余混合物以20～25 KHz每隔2 min超声破碎5～10次，共10～20 min，并组织匀浆20～25 min；2）丢糟蛋白酶解：将上述匀浆液，用1 mol/L盐酸调pH值至5.5～6.0，50 ℃预热5 min，加入重量比6%木瓜蛋白酶，50～60 ℃恒温酶解4 h，于80 ℃灭酶10～15 min终止反应，将酶解产物进行3kDa膜超滤，收集膜外液冷冻干燥后得活性肽，测定分子量分布比例及生物活性；活性肽收率11‑12%；3）活性肽的提纯：将上述所得活性肽溶于去离子水，上样于Superdex‑Peptide凝胶柱，流速为0.3～0.5 ml/min，以去离子水为洗脱液，在检测波长220 nm下收集各组分，冷冻干燥测定ACE抑制率及DPPH·清除率；将活性较高的冻干组分用纯水溶解后，上样于高效液相色谱C18柱，色谱条件为：流速1 ml/min，柱温25 ℃，检测波长220 nm，流动相为乙腈和纯水，流动相的洗脱过程历时35 min；在流动相出口处收集各组分，测定其ACE抑制率和DPPH清除率，将活性最高的组分冷冻干燥，得纯度达92.1%的活性肽。