[发明专利]利用含凝血酶敏感蛋白模体的去解联金属蛋白酶基因选择山羊产羔数的分子标记方法

摘要

本发明公开了一种利用含凝血酶敏感蛋白模体的去解联金属蛋白酶基因选择山羊产羔数的分子标记方法，该方法以山羊基因组DNA序列为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用对引物P1在PCR条件下进行扩增含凝血酶敏感蛋白模体的去解联金属蛋白酶(ADAMTS1)基因外显子2，采用DNA测序技术检测外显子2的单核苷酸的多态性(SNP)，测序结果发现引物P1扩增位点存在1个碱基的突变，然后对引物P1的扩增产物进行基因分型和基因频率分析，以及与河南奶山羊和西农萨能奶山羊的产羔性状之间进行关联分析；结果表明：ADAMTS1基因外显子2由引物P1检测的SNP位点可用作山羊产羔数性状选择的分子标记。

主权项

一种利用含凝血酶敏感蛋白模体的去解联金属蛋白酶基因选择山羊产羔数的分子标记方法，其特征在于，包括下列步骤：1)以山羊基因组DNA为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用引物P1在PCR条件下进行扩增，筛查山羊ADAMTS1基因外显子2的碱基突变；所述的引物P1如下：上游引物1F：5′‑GTGAGCCTGGTGGTGGTA‑3′；下游引物1R：5'‑AATCGCGGTGTCATAGTG‑3'；所述的PCR扩增的条件是：15μL的PCR反应体系：DNA模板50ng，7.5μl 2×Taq MasterMix，上下游引物各0.3μl，加灭菌水至15μl；PCR反应条件：95℃预变性5min；94℃30s，退火温度50℃，退火30s，72℃延伸30s，35个循环；最后72℃延伸10min。；所述的利用引物P1PCR扩增反应程序如下：95℃预变性5min，94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸40s，共进行35个循环，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；2)采用DNA测序技术检测引物P1扩增的PCR扩增产物，然后对引物P1的PCR扩增产物进行基因分型和基因频率分析，以及与河南奶山羊和西农萨能奶山羊的产羔性状之间进行关联分析，结果如下：纯合型TT在2016bp位的碱基是T，杂合型TC在2016bp位的碱基是T/C，杂合型CC在2016bp位的碱基是C。