[发明专利]基于DNA信号放大技术合成银纳米簇的电化学生物传感器的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了基于DNA信号放大技术合成银纳米簇的电化学生物传感器的制备方法及其应用，具体步骤如下：（1）将石墨烯溶于醋酸缓冲液中，于超声清洗器中超声分散得到石墨烯分散液；（2）将磷酸缓冲液、延伸后的DNA反应液和硝酸银水溶液溶于二次蒸馏水于PCR管中混合均匀，然后冰浴孵育使银离子与DNA相结合，再加入硼氢化钠水溶液，持续振荡使银离子被还原后，室温下避光反应得到银纳米簇；（3）将石墨烯电沉积到裸玻碳电极，再滴加DNA‑AgNCs溶液，避光组装冲洗即可，可用于检测过氧化氢和TdT酶浓度，优点是特异性好、灵敏度高、检测速度快，结果准确可靠、成本低。

主权项

1.一种基于DNA信号放大技术合成银纳米簇的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于具体步骤如下：(1)氧化石墨烯的分散将5.0～10.0mg氧化石墨烯溶于5.0～10.0mL浓度为0.1～0.3M的pH＝5.0～6.0的醋酸缓冲液中，于超声清洗器中超声分散2～5h，得到氧化石墨烯分散液；(2)银纳米簇的制备a.依次移取1.0～3.0μL二次蒸馏水，5.0～10.0μL浓度为10.0～15.0μM的DNA溶液，1.0～2.0μL浓度为10.0～15.0mM的dCTP溶液，1.0～2.0μL 5×TdT反应缓冲液及0.2～0.4μL浓度为10.0～20.0U/μL的TdT溶液于PCR管中，振荡2～5min使试剂混合均匀，然后置于35～38℃恒温水浴中反应2～3h后，再将PCR管置于70～80℃水浴中10～20min使反应终止，得到延伸后的DNA反应液；其中所述的DNA为3′端修饰有羟基的单链DNA；b.依次移取25.0～50.0μL浓度为20.0～40.0mM、pH＝7.0的磷酸缓冲液，5.0～10.0μL延伸后的DNA反应液，5.0～10.0μL浓度为1.0～3.0mM的硝酸银水溶液，10.0～20.0μL二次蒸馏水于PCR管中，振荡使溶液混合均匀，然后冰浴孵育15～20min使银离子与DNA相结合，向孵育后的混合液中迅速加入5.0～10.0μL新配制的浓度为1.0～3.0mM的硼氢化钠水溶液，持续振荡1～2min使银离子被还原后，将PCR管用锡箔纸包裹，室温下避光反应1.5～2.5h，得到银纳米簇；(3)电化学生物传感器的制备a.首先将玻碳电极在麂皮上用三氧化二铝粉末抛光2～5min，抛光后将电极置于超声清洗器中用二次蒸馏水中超声清洗2～5min，然后用N2吹干，得到裸玻碳电极；b.利用循环伏安法将氧化石墨烯电沉积到裸玻碳电极得到rGO/GCE；在rGO/GCE上滴加3.0～5.0μLDNA‑AgNCs溶液，避光组装10～20min后，用二次蒸馏水缓缓冲洗电极，得到基于DNA信号放大技术合成银纳米簇的电化学生物传感器。