[发明专利]一种利用较低血清含量营养物培养DF1细胞以制备鸡传染性法氏囊病毒的方法有效
| 申请号： | 201610777582.3 | 申请日： | 2016-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN106282098B | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 冯玉斗;李亚杰;付旭彬;杨保收;李守军 | 申请（专利权）人： | 天津瑞普生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12N7/00;C12N7/02 |
| 代理公司： | 天津合志慧知识产权代理事务所(普通合伙) 12219 | 代理人： | 陈松 |
| 地址： | 300308 天津市滨海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用较低血清含量营养物培养DF1细胞以制备鸡传染性法氏囊病毒的方法，属于兽用生物制品技术领域，主要包括以下步骤：S1.制备用细胞的传代与培养；S2.驯化细胞适应低血清培养基；S3.驯化细胞适应低血清培养环境；S4.细胞种毒的繁殖；S5.收获病毒液的处理；S6.收获病毒液的TCID50测定。本发明提供的方法主要是利用纤连蛋白(FN)促细胞生长、提高细胞贴壁率，增强细胞的代谢水平使细胞适应低血清的培养环境后，再逐步去除纤连蛋白(FN)，通过此方法可获得适应低血清培养的DF1细胞，可显著降低生产成本，能够快速稳定的扩大生产规模，质量易于实现均衡稳定。 | ||
| 搜索关键词： | 低血清 细胞 细胞适应 制备 鸡传染性法氏囊病毒 培养环境 纤连蛋白 驯化 病毒液 营养物 低血清培养基 兽用生物制品 传代 代谢水平 快速稳定 扩大生产 细胞生长 细胞贴壁 细胞种毒 收获 去除 繁殖 均衡 | ||
【主权项】：
1.一种利用较低血清含量营养物培养DF1细胞以制备鸡传染性法氏囊病毒的方法，其特征在于包括以下步骤：1)取DF1细胞，接种于含有8％(v/v)新生牛血清、10mg/L纤连蛋白的DMEM/F12培养基，培养过程中更换若干次培养基，每次更换的培养基中新生牛血清含量不变、而纤连蛋白含量较前次低，直至更换为含有8％(v/v)新生牛血清的DMEM/F12培养基，即得到第一代驯化细胞；2)取所述第一代驯化细胞，接种于含有6％(v/v)新生牛血清、20mg/L纤连蛋白的DMEM/F12培养基，培养过程中更换若干次培养基，每次更换的培养基中新生牛血清含量不变、而纤连蛋白含量较前次低，直至更换为含有6％(v/v)新生牛血清的DMEM/F12培养基，即得到第二代驯化细胞；3)取所述第二代驯化细胞，接种于含有4％(v/v)新生牛血清、30mg/L纤连蛋白的DMEM/F12培养基，培养过程中更换若干次培养基，每次更换的培养基中新生牛血清含量不变、而纤连蛋白含量较前次低，直至更换为含有4％(v/v)新生牛血清的DMEM/F12培养基，即得到第三代驯化细胞；4)取所述第三代驯化细胞，接种于含有2％(v/v)新生牛血清、40mg/L纤连蛋白的DMEM/F12培养基，培养过程中更换若干次培养基，每次更换的培养基中新生牛血清含量不变、而纤连蛋白含量较前次低，直至更换为含有2％(v/v)新生牛血清的DMEM/F12培养基，即得到第四代驯化细胞；5)取步骤4所述第四代驯化细胞，接种鸡传染性法氏囊病毒，以含有0～2％(v/v)新生牛血清的DMEM/F12培养基培养，收获培养物。
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