[发明专利]一种产(‑)γ‑内酰胺酶重组大肠杆菌的发酵方法在审
申请号: | 201610643906.4 | 申请日: | 2016-08-09 |
公开(公告)号: | CN106222152A | 公开(公告)日: | 2016-12-14 |
发明(设计)人: | 宋亮;李岩;赵飞;陈玮 | 申请(专利权)人: | 苏州开元民生科技股份有限公司 |
主分类号: | C12N9/86 | 分类号: | C12N9/86;C12R1/19 |
代理公司: | 南京苏科专利代理有限责任公司32102 | 代理人: | 陈忠辉;姚姣阳 |
地址: | 215021 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明提供了一种产(‑)γ‑内酰胺酶重组大肠杆菌的发酵方法,包括菌种的活化,菌株的活化及接种培养并通过种子的发酵罐培养进行发酵 最后通过离心的方式获得菌体,所述菌体的湿菌体达70g/L以上。本发明培养基成分简单,所用原料均为普通生物发酵原料;发酵过程时间短,10小时内基本发酵完毕发酵控制简单,拆分效果好。无需添加其他碳氮源,发酵过程稳定,易控制。 | ||
搜索关键词: | 一种 内酰胺 重组 大肠杆菌 发酵 方法 | ||
【主权项】:
一种产(‑)γ‑内酰胺酶重组大肠杆菌的发酵方法,其特征在于,包括如下步骤:S1、菌种的活化,从保存好的冷冻甘油管或冻干管中取出菌种,通过平板活化至平板上有单个菌株出现;S2、菌株的活化,将培养出的菌株进行活化;S3、菌株接种培养,将活化后的菌株接种于灭菌好后的摇瓶种子培养基中,在30‑37℃、100‑150转/min下,恒温震荡培养8‑12小时;S4、种子的发酵罐培养,按照发酵培养基的成分配置发酵罐,灭菌并降温(葡萄糖和硫酸镁单独灭菌),待种子培养结束后通过火焰接种口接种进罐,初始进罐溶氧为100%,控制条件38‑42℃,通气量为1.5‑2vvm发酵罐培养,保持pH为6.8‑7.2,控制搅拌联动转速,保证溶氧不低于10%,转速控制不超过400转;S5、发酵开始后,流加葡萄糖,流加的速度保持3小时补完6g/L的葡萄糖为准;发酵至葡萄糖消耗完,溶氧上升;此时开始流加乳糖,流加速度控制为5小时补完10g/L的乳糖为准,发酵10小时后,放罐;S6、最后通过离心的方式获得菌体,所述菌体的湿菌体达70g/L以上。
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