[发明专利]利用颗粒细胞GRIM-19相对表达量来评价卵母细胞发育潜能的方法

摘要

本发明公开了一种利用颗粒细胞GRIM‑19相对表达量来评价卵母细胞发育潜能的方法，卵母细胞的颗粒细胞中GRIM‑19的相对表达量为0.16‑0.35时，判断得到的卵母细胞为高发育潜能的卵母细胞，当GRIM‑19的相对表达量为0‑0.12时，判断得到的卵母细胞为低发育潜能的卵母细胞，内参选用β‑肌动蛋白(β‑action)基因。本发明是一种较为客观、准确、可量化的卵母细胞质量评价方法，无创、且无需反复拿出培养箱观察，减少了不良环境刺激。由于本发明可量化，有具体的数值范围，操作容易，避免了因人为主观因素使判断标准出现不统一的问题。

主权项

1.一种利用颗粒细胞中GRIM‑19相对表达量来评价卵母细胞发育潜能的方法，所述颗粒细胞中GRIM‑19相对表达量指的是GRIM‑19mRNA和内参β‑肌动蛋白基因表达比值，其特征是：颗粒细胞中GRIM‑19/β‑action值为0.16‑0.35时，判断得到的卵母细胞为高发育潜能的卵母细胞，GRIM‑19/β‑action值为0‑0.12时，判断得到的卵母细胞为低发育潜能的卵母细胞；具体包括以下步骤：(1)收集颗粒细胞；(2)对步骤(1)中颗粒细胞进行RNA提取；(3)针对步骤(2)中的RNA进行逆转录得到cDNA；(4)以β‑肌动蛋白基因作为内参，针对β‑肌动蛋白基因和GRIM‑19基因设计引物；(5)进行实时定量荧光PCR，通过CT值计算GRIM‑19相对表达量；其中，步骤(1)中，收集颗粒细胞的方法，具体是：从月经第8天起每天B超监测卵泡大小，至少3个主导卵泡直径≥18mm时，注射人绒毛膜促性腺激素5000～10000 U，34～36h后B超介导下取卵；去除卵丘‑卵母细胞复合体中最外层的部分颗粒细胞，清洗，去除卵泡液中的杂质，置于离心管中备用。