[发明专利]一种基于羧肽酶和强阳离子交换色谱的蛋白质C-端富集方法在审
| 申请号： | 201610321701.4 | 申请日： | 2016-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN107384998A | 公开（公告）日： | 2017-11-24 |
| 发明（设计）人： | 张丽华;陈玲凡;单亦初;杨开广;张玉奎 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K1/18 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于羧肽酶和强阳离子交换色谱的蛋白质C‑端富集方法，包括封闭蛋白质自由羧基、蛋白质碱性位点酶切、离子交换色谱分离、肽段羧基端碱性氨基酸剪切。蛋白质样品首先在蛋白质水平上封闭C末端及侧链的自由羧基，然后对蛋白的碱性位点进行酶切以产生羧基端为碱性氨基酸的中间肽段，并采用离子交换色谱对酶切产物进行分级得到多个级分，最后对中间肽段羧基端的碱性氨基酸进行剪切，并将每个级分进行二次离子交换色谱分离以排除保留时间发生偏移的中间肽段，获得蛋白质的C端肽段。本发明的优点是酶切效率高、去除效率高、富集效率高、可采用多种酶酶切、提高了C端鉴定的覆盖度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 羧肽酶 阳离子 交换 色谱 蛋白质 富集 方法 | ||
【主权项】：
一种基于羧肽酶和强阳离子交换色谱的蛋白质C端富集方法，包括：1)封闭蛋白质上的自由羧基：采用羧基活性试剂封闭蛋白质上C端以及侧链的自由羧基；2)蛋白质碱性位点酶切：采用酶切位点为精氨酸或赖氨酸羧基端的蛋白水解酶酶解蛋白质；3)强阳离子交换色谱分离：采用强阳离子交换色谱分离肽段；4)羧肽酶剪切肽段羧基端碱性氨基酸后二次强阳离子交换色谱分离：采用羧肽酶B特异性剪切肽段羧基端精氨酸和赖氨酸后二次强阳离子交换色谱分离。
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