[发明专利]一种神经系统细菌感染和混合性细菌感染试剂盒

摘要

本发明公开了一种神经系统细菌感染和混合性细菌感染试剂盒，由第一克隆组件和第二克隆组件组成，第一克隆组件用来PCR扩增来自病人体液的细菌的基因组中编码16S rRNA的DNA的序列，第二克隆组件针对混合性细菌感染，用来将第一克隆组件PCR扩增获得的扩增产物克隆到载体中进行蓝白斑筛选，进而获得目的序列以测序，并进行菌种鉴定。本发明能够非常精确地诊断出神经系统细菌感染及混合性细菌感染的致病细菌，大大改善病人的抗生素运用效果、缩短住院时间、降低致死率。

主权项

一种神经系统细菌感染和混合性细菌感染试剂盒，其特征在于：由第一克隆组件和第二克隆组件组成，第一克隆组件用来PCR扩增来自病人体液的细菌的基因组中编码16S rRNA的DNA的序列，第二克隆组件针对混合性细菌感染，用来将第一克隆组件PCR扩增获得的扩增产物克隆到载体中进行蓝白斑筛选，进而获得目的序列以测序，并进行菌种鉴定；第一克隆组件包括：阳性对照E coli基因组DNA 100μL、正向引物16S rRNA‑F 10μL、反向引物16S rRNA‑R、双蒸水3mL和2x PCR master mix 2.5mL，其中：阳性对照E coli基因组DNA的浓度为1ng/μL；正向引物16S rRNA‑F如SEQ ID NO 01所示，浓度为100μM；反向引物16S rRNA‑R如SEQ ID NO 02所示，浓度为100μM；第二克隆组件包括：用于菌落PCR的正向引物pMD18‑T‑F 10μL、用于菌落PCR的反向引物pMD18‑T‑R 10μL、双蒸水3mL、2x PCR master mix 2.5mL、LB液体培养基100mL、LB培养基琼脂糖培养平板100个和pMDTM18‑T Vector Cloning Kit，其中：菌落PCR测序正向引物pMD18‑T‑F如SEQ ID NO 03所示，浓度为100μM；菌落PCR测序反向引物pMD18‑T‑R如SEQ ID NO 04所示，浓度为100μM；LB培养基琼脂糖培养平板中含有X‑Gal、IPTG和氨苄西林；上述2x PCR master mix的配方为：Taq 0.1U/μL，dNTP各0.4mM，100mM KCl，3mM MgCl2，20mM Tris‑HCl，pH8.3。