[发明专利]一种神经系统细菌感染和混合性细菌感染试剂盒

权利要求书

1.一种神经系统细菌感染和混合性细菌感染试剂盒，其特征在于：由第一克隆组件和第二克隆组件组成，第一克隆组件用来PCR扩增来自病人体液的细菌的基因组中编码16S rRNA的DNA的序列，第二克隆组件针对混合性细菌感染，用来将第一克隆组件PCR扩增获得的扩增产物克隆到载体中进行蓝白斑筛选，进而获得目的序列以测序，并进行菌种鉴定；

第一克隆组件包括：阳性对照E coli基因组DNA 100μL、正向引物16S rRNA-F 10μL、反向引物16S rRNA-R、双蒸水3mL和2x PCR master mix 2.5mL，其中：阳性对照E coli基因组DNA的浓度为1ng/μL；正向引物16S rRNA-F如SEQ ID NO 01所示，浓度为100μM；反向引物16S rRNA-R如SEQ ID NO 02所示，浓度为100μM；

第二克隆组件包括：用于菌落PCR的正向引物pMD18-T-F 10μL、用于菌落PCR的反向引物pMD18-T-R 10μL、双蒸水3mL、2x PCR master mix 2.5mL、LB液体培养基100mL、LB培养基琼脂糖培养平板100个和pMD^TM18-T Vector Cloning Kit，其中：菌落PCR测序正向引物pMD18-T-F如SEQ ID NO 03所示，浓度为100μM；菌落PCR测序反向引物pMD18-T-R如SEQ ID NO 04所示，浓度为100μM；LB培养基琼脂糖培养平板中含有X-Gal、IPTG和氨苄西林；

上述2x PCR master mix的配方为：Taq 0.1U/μL，dNTP各0.4mM，100mM KCl，3mM MgCl₂，20mM Tris-HCl，pH8.3。

2.如权利要求1所述的一种神经系统细菌感染和混合性细菌感染试剂盒，其特征在于：所述第一克隆组件的PCR反应体系的体积为50μL，具体如下：

3.如权利要求2所述的一种神经系统细菌感染和混合性细菌感染试剂盒，其特征在于：所述第一克隆组件的PCR扩增程序如下：95℃预变性5min；95℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸10min；共进行两轮PCR。

4.如权利要求1所述的一种神经系统细菌感染和混合性细菌感染试剂盒，其特征在于：所述菌落PCR的反应体系的体积为50μL，具体如下：

5.如权利要求4所述的一种神经系统细菌感染和混合性细菌感染试剂盒，其特征在于：所述菌落PCR的PCR扩增程序如下：95℃预变性2min；95℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸100s，33个循环；72℃延伸10min。