[发明专利]用于微囊化大肠杆菌口服疫苗免疫抗体检测的检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明属于生物疫苗效果的检测方法及检测试剂盒的研发技术领域，特别是涉及一种用于微囊化口服疫苗免疫效果血清学抗体效价检测的检测方法及检测试剂盒。该检测方法包括下述步骤：（1）抗原包；（2）洗涤；（3）封闭；（4）洗涤；（5）加一抗；（6）洗涤；（7）加二抗；（8）洗涤；（9）显色；（10）终止；（11）酶标仪测OD值。使用本检测方法能很好的监测大肠杆菌口服疫苗免疫效果，运用本方法制备的检测试剂盒，则能够快速及时进行实地监测。

主权项

用于微囊化大肠杆菌口服疫苗免疫抗体检测的检测方法，其特征在于：该检测方法包括下述步骤：(1)抗原包被：用pH为9.6的碳酸盐缓冲液0.05mol/L将抗原按一定比例稀释，每孔加入100μl，4℃包被24h；(2)洗涤：取出后室温平衡30分钟，弃去液体，用1倍含0.05％吐温–20的pH为7.4的磷酸盐缓冲液PBST洗涤3次，每次1min，在吸水纸上吸干；(3)封闭：加1％BSA封闭液每孔100μl，37℃孵育1h；(4)洗涤：弃液体，洗涤3次，吸水纸吸干；(5)加一抗：加用0.1％BSA稀释液稀释的标准阳性血清每孔100μl，37℃孵育1小时，所述一抗为待测血清中的抗体；(6)洗涤：洗涤3次，吸水纸吸干；(7)加二抗：加用0.1％BSA稀释至工作浓度为1∶5000的辣根过氧化物酶标HRP羊抗大鼠IgG每孔100μl，37℃温育1h；所述二抗为辣根过氧化物酶标HRP羊抗大鼠IgG；(8)洗涤：洗涤3次，于吸水纸上吸干；(9)显色：加邻苯二胺OPD底物溶液，每孔100μl，微量振荡器振荡2min，37℃温育30min；(10)终止：加终止液50μl，微量振荡器振荡2min，静置作用15min；(11)酶标仪测OD值：酶标仪492nm和630nm双波长测OD值，并与制备好的标准曲线及回归方程进行比对判断。