[发明专利]一种高含量西索霉素发酵液的制备方法

摘要

本发明公开了一种高含量西索霉素发酵液的制备方法，属于药物合成领域。本发明针对目前西索霉素发酵液生物效价较低，高低悬殊较大，生产不稳定，西索霉素的主组份不高，提取纯化收率低的问题，本发明首先通过伊尼奥小单孢菌进行活化，再将活化后的菌种在甲磺酸乙酯及微波状态下诱导变异，再将变异菌种放入发酵罐中，在氯化钴溶液催进西索霉素的产生，同时在针对菌液的引发下，产生西索霉素，再通过过滤分离，从而制备得高含量西索霉素发酵液，纯化收率高。

主权项

一种高含量西索霉素发酵液的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按重量百份比计，取30～35份蔗糖、22～25份琼脂、13～15份质量分数为10％的硝酸钾溶液、10～12份质量分数为12％的氯化钠溶液及18～20份葡萄糖，搅拌均匀后使用质量分数为5％的氢氧化钠溶液调节pH至7.0，在120～130℃下，消毒杀菌30～40min，得斜面培养基；（2）使用接种环将伊尼奥小单孢菌接种至上述斜面培养基，接种1～3次，将接种后的斜面培养基置于32～35℃，无菌环境下，培养7～9天后，将培养基移至0～4℃的冰箱中储存4～6天，得斜面培养后的菌种，备用；（3）按重量份数计，取35～42份淀粉、15～18粉豆腐渣、30～32份牛肉膏、3～4份L‑脯氨酸、8～10份质量分数为10％的硫酸镁溶液、0.6～1.2份磷酸氢二钾及0.4～0.8份磷酸二氢钾，搅拌均匀后使用质量分数为5％的氢氧化钠溶液调节pH至7.5，在110～120℃下，消毒杀菌30～40min，得种子培养基；（4）按照种子培养基体积8～12％的接种量，将步骤（2）中备用的斜面培养后的菌种接种至种子培养基上，随后将种子培养基移至摇床培养箱中，在30～35℃，190～220r/min下，培养50～60h，在培养过程中，每8～10h向其中加入种子培养基体积0.8～1.4％的甲磺酸乙酯；（5）待上述培养结束后将种子培养基取出，置于微波振荡器中，在500～800MHz下振荡2～3h，再将振荡后的种子培养基按照15～18％的接种量，放入发酵瓶中，分别向其中加入种子培养基质量4～6％的麦芽糖、种子培养基质量1～3％的质量分数为10％的氯化钴溶液，搅拌均匀，温度设定为30～35℃，转速设定为160～190r/min，通气量为1:1.3～1.9，发酵5～7天，在发酵过程中每5～7h，向其中加入氯化钴溶液等体积的1.3×10⁵CFU/mL铜绿假单胞菌菌液；（6）待上述发酵结束后收集发酵液进行过滤，收集过滤液，将所得的过滤液放入离心机中，在9000～10000r/min下离心分离5～8min后，收集上清液，在紫外灯下杀菌，即可得到高含量西索霉素发酵液。