[发明专利]一种用于核酸扩增的酵母样真菌总DNA无仪器提取方法

摘要

本发明涉及真菌分子生物学领域，具体是一种用于核酸扩增的酵母样真菌总DNA无仪器快速提取方法，所述方法将化学裂解法和酶裂解法两大酵母破壁方法巧妙整合，结合抽吸装置、过滤装置以及核酸提取注射器，无需供电设备在1.5到3小时内完成DNA提取，是目前唯一的酵母菌无仪器DNA高效提取方法。本发明的提取方法具有快速简便、灵敏、无毒、低成本等优点，可适用于绝大部分酵母样真菌。

主权项

1.一种用于核酸扩增的酵母样真菌总DNA无仪器提取方法，其特征在于，包括以下步骤：A、用抽吸装置抽取酵母样真菌菌液；B、抽吸装置连接过滤装置，推出滤液，而菌体留在过滤装置中，进行后续无仪器核酸提取；C、抽吸装置经过过滤装置吸取胍盐裂解液；D、取下过滤装置，将菌体‑裂解液混合液推出，放入90‑100℃中保温10‑15分钟；E、冷却后，加入蛋白酶K；最终工作浓度是50‑100μg/ml；孵育温度为55至65℃；孵育时间为2小时；F、连接新的过滤装置，推出裂解液到EP管；G、加入裂解液1/10体积的核酸沉淀剂，混匀后加入2倍体积的95％‑100％浓度乙醇，静置15‑30分钟；H、用核酸提取注射器缓慢吸入混合液全部，缓慢推出液体，完成核酸吸附；I、用核酸清洗液完成滤膜上杂质的清洗；J、用核酸洗脱液完成核酸洗脱；所述的过滤装置中的滤膜孔径小于1μm；所述的步骤C中的胍盐裂解液配方为：每1000ml裂解液中，包含：三羟甲基氨基甲烷0.047mol，乙二胺四乙酸二钠0.020mol，异硫氰酸胍3.0mol，Triton X‑100 11.3ml，用水补足1000ml，用盐酸将pH调至6.53。