[发明专利]一种草分枝杆菌注射液的制备方法及草分枝杆菌注射液

摘要

本发明提出了一种草分枝杆菌注射液的制备方法，该方法采用原始菌种-主种子批-工作种子批三级培养的方式，最后工作种子批经发酵培养，分离、纯化、灭菌，获得草分枝杆菌原液。所述原液经过聚山梨酯80和氯化钠所配制的稀释液的稀释，直接得到草分枝杆菌注射液。按照本发明所提出的草分枝杆菌注射液制备方法，具有菌种保持性好、安全程度高、成本低、生产效率高的特点。

主权项

一种草分枝杆菌注射液的制备方法，包括以下步骤：a)将将草分枝杆菌的原始冻干菌种溶解、用稀释的苏通培养基稀释、分装，完成原始种子批的建立，并在‑70摄氏度环境下保存；b)对原始种子批菌种进行检查，并将合格的原始种子批菌种解冻、过滤、稀释、接种于改良罗氏培养基上在30‑40摄氏度的环境下培养120‑150小时；c)将步骤b)中获得的菌体进行研磨、稀释后接种于改良罗氏培养基上，在30‑40摄氏度的环境下培养168‑196小时，经洗脱、研磨、分装，形成主种子批菌种，并进行检验；d)将检验合格的主种子批菌种接种于改良罗氏培养基上，在30‑40摄氏度的环境下培养196‑240小时，经洗脱、研磨、分装，形成工作种子批菌种，并进行检查；e)将工作种子批菌种通过复苏、扩增形成工作种子液，将工作种子液按照体积比1‑5％的接种量将工作种子液接种到发酵罐内的发酵培养基中，培养条件为35‑42摄氏度，通气量为0.5‑1.5L/分钟、以50‑300rpm转速的条件下培养360‑450小时，收集之后用0.8‑1.0％的NaCl冲洗液进行冲洗、过滤，纯化、灭菌之后即获得草分枝杆菌原液；f)以聚山梨酯80和氯化钠及注射用水混合，过滤配制成稀释液，所述稀释液中聚山梨酯80的体积百分比是0.05‑0.4％，氯化钠重量百分比是0.7‑1.1％，其中过滤之后的稀释液与草分枝杆菌原液混合，获得草分枝杆菌药液；g)将草分枝杆菌药液灌封在清洁灭菌后的安瓿瓶中，终端灭菌检漏后，即为草分枝杆菌注射液。