[发明专利]一种草分枝杆菌注射液的制备方法及草分枝杆菌注射液

权利要求书

1.一种草分枝杆菌注射液的制备方法，包括以下步骤：

a)将将草分枝杆菌的原始冻干菌种溶解、用稀释的苏通培养基稀释、分装，完成原 始种子批的建立，并在-70摄氏度环境下保存；

b)对原始种子批菌种进行检查，并将合格的原始种子批菌种解冻、过滤、稀释、接 种于改良罗氏培养基上在30-40摄氏度的环境下培养120-150小时；

c)将步骤b)中获得的菌体进行研磨、稀释后接种于改良罗氏培养基上，在30-40摄 氏度的环境下培养168-196小时，经洗脱、研磨、分装，形成主种子批菌种，并进行检 验；

d)将检验合格的主种子批菌种接种于改良罗氏培养基上，在30-40摄氏度的环境下 培养196-240小时，经洗脱、研磨、分装，形成工作种子批菌种，并进行检查；

e)将工作种子批菌种通过复苏、扩增形成工作种子液，将工作种子液按照体积比1-5％ 的接种量将工作种子液接种到发酵罐内的发酵培养基中，培养条件为35-42摄氏度，通气 量为0.5-1.5L/分钟、以50-300rpm转速的条件下培养360-450小时，收集之后用0.8-1.0％ 的NaCl冲洗液进行冲洗、过滤，纯化、灭菌之后即获得草分枝杆菌原液；

f)以聚山梨酯80和氯化钠及注射用水混合，过滤配制成稀释液，所述稀释液中聚山 梨酯80的体积百分比是0.05-0.4％，氯化钠重量百分比是0.7-1.1％，其中过滤之后的稀释 液与草分枝杆菌原液混合，获得草分枝杆菌药液；

g)将草分枝杆菌药液灌封在清洁灭菌后的安瓿瓶中，终端灭菌检漏后，即为草分枝 杆菌注射液。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

所述苏通培养基的配方是(单位：g/L)：天门冬素4g、枸橼酸盐2g、磷酸氢二钾 0.5g、MgSO₄.7H₂O0.5g、枸橼酸铁铵0.5g、甘油-6ml；

调节PH值至弱碱性，然后采用湿热灭菌法进行二次灭活，步骤为：

对配制好的苏通培养基在121摄氏度温度下进行灭活处理30分钟；

一次灭活完成后的苏通培养基，在常温下静置4小时，然后以121摄氏度的温度再次 进行灭活处理35分钟，完成二次灭活处理。

3.如权利要求1-2任一所述的方法，其特征在于：

所述改良罗氏培养基的配方是(单位：g/L)：

磷酸二氢钾2.4、硫酸镁0.24、柠檬酸镁0.6、L-谷氨酸钠7.2、孔雀绿0.4、马 铃薯淀粉30，并调节PH值至弱碱性，然后采用湿热灭菌法进行二次灭活，步骤为：

对配制好的改良罗氏培养基在121摄氏度温度下进行灭活处理30分钟；

一次灭活完成后的改良罗氏培养基，在常温下静置4小时，然后以121摄氏度的温度 再次进行灭活处理30分钟，完成二次灭活处理。

4.如权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：

所述发酵培养基的配方是(单位：g/L)：磷酸二氢钾1.5、磷酸氢二钠1.5、硫酸 铵0.5、硫酸镁0.055、硫酸铜0.001、味精0.5、柠檬酸钠0.45、琼脂粉15、甘油6、 酵母膏5、马铃薯淀粉15、葡萄糖5，然后再用湿热灭菌法进行灭活处理，具体方法是：

将配好的发酵培养基在121摄氏度温度下进行灭活处理30分钟。

5.一种草分枝杆菌注射液，所述草分枝杆菌注射液是由如权利要求1-4任一所述的 方法制备而成。