[发明专利]一种鸡基因AGK甲基化检测方法及其应用

摘要

本发明涉及基因工程技术领域，提供了一种鸡基因AGK甲基化检测方法及其应用，该方法提供了鸡基因AGK甲基化检测的特异性引物及配合该引物使用的巢式PCR条件，利用上述引物和方法，可以准确检测鸡感染肠炎沙门氏菌后AGK基因中的甲基化情况，并可以以此作为分子标记为鸡抗肠炎沙门氏菌感染提供理论依据。

主权项

1.一种非诊疗目的鸡基因AGK甲基化检测方法在鸡抗肠炎沙门氏菌感染中的应用，其特征在于：所述鸡基因AGK甲基化检测方法为巢式PCR，所采用的鸡AGK基因特异性的甲基化引物，其序列如下表所示：上述引物前一对为第一对引物，后一对为第二对引物，利用上述2对特异性引物对经亚硫酸盐修饰处理后的鸡的全基因组基因DNA进行巢式PCR，两次反应条件一致，其PCR扩增反应体系如下，每20μL体系为：H₂O3.6μl2×buffer GC10μl50pM/ul up Primer1μl50pM/ul down Primer1μlTemplate1μlrTaq酶0.2μl2.5mM dNTP3.2μlPCR扩增条件为：所获得的扩增产物进行大肠杆菌克隆，转化成功后直接进行测序，以确定甲基化是否受到抑制；其中所述的亚硫酸盐修饰处理采用QIAGEN公司甲基化修饰试剂盒对鸡基因组DNA进行亚硫酸盐修饰处理，使未发生甲基化的胞嘧啶位置转换成尿嘧啶，而发生甲基化位点因5′‑甲基胞嘧啶的保护而不发生变化。