[发明专利]一种鸡基因AGK甲基化检测方法及其应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，提供了一种鸡基因AGK甲基化检测方法及其应用，该方法提供了鸡基因AGK甲基化检测的特异性引物及配合该引物使用的巢式PCR条件，利用上述引物和方法，可以准确检测鸡感染肠炎沙门氏菌后AGK基因中的甲基化情况，并可以以此作为分子标记为鸡抗肠炎沙门氏菌感染提供理论依据。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，提供了一种鸡基因AGK甲基化检测方法及其应用。

背景技术

鸡肠炎沙门氏菌病是家禽生产中的常见疾病，肠炎沙门氏菌能够透过蛋壳进入鸡蛋产品中，且能在生殖道中寄存繁殖。之前有报道，美洲等发达国家中发生的食物中毒事件，大多数是由禽类的沙门氏菌而引起的，而其中，起主要作用的病原就是肠炎沙门氏菌。肠炎沙门氏菌对家禽生产造成重大影响，引起畜禽发病，而且是食源性致病菌，能通过家禽副产品给人类的健康带来很大的威胁，是报道最频繁的致病微生物之一。

AGK基因在疾病中尤其是癌症中具有重要的调控作用，已有研究证明AGK基因在各种肿瘤中例如前列腺癌、食道鳞状癌症、卵巢癌、胃癌、乳癌等中表达上调。此外，AGK基因能作为肝细胞癌一个新的药物作用靶点。到目前为止，尚未有关于AGK基因在鸡肠炎沙门氏菌感染中发挥的甲基化调控作用的报道。

发明内容

本发明的发明人针对上述现有技术的情况，结合长期研究和探索，提供了一种鸡基因AGK甲基化检测方法及其应用，该方法提供了鸡基因AGK甲基化检测的特异性引物及配合该引物使用的巢式PCR条件，利用上述引物和方法，可以准确检测鸡感染肠炎沙门氏菌后AGK基因中的甲基化情况，并可以以此作为分子标记为鸡抗肠炎沙门氏菌感染提供理论依据。

发明人提供的具体技术方案如下：

一种鸡基因AGK甲基化检测方法，所采用的方法为巢式PCR，所采用的鸡AGK基因特异性的甲基化引物，其序列如下表所示：

上述引物前一对为第一对引物，后一对为第二对引物，利用上述2对特异性引物对经亚硫酸盐对修饰处理后的鸡的全基因组基因DNA进行巢式PCR，2次反应条件一致，其PCR扩增反应体系如下，每20μL体系为：