[发明专利]同时定量南美白对虾中两种致病菌活菌的方法在审
| 申请号： | 201610016285.7 | 申请日： | 2016-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN105543367A | 公开（公告）日： | 2016-05-04 |
| 发明（设计）人： | 赵勇;肖莉莉;张昭寰;娄阳;杜苏萍;潘迎捷 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/63;C12R1/42 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 曹莉 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种同时定量南美白对虾中两种致病菌活菌的方法；所述方法包括如下步骤：将叠氮溴化丙锭母液加入待测的南美白对虾虾液匀浆中，获得叠氮溴化丙锭-样品混合液；暗处理后曝光，高速离心，收集菌体；对所述菌体进行DNA提取；以提取得到的DNA为模板，以副溶血性弧菌的tlh基因和沙门氏菌的orgC基因作为靶基因，进行多重荧光定量PCR扩增反应，输出相应的循环阈值；将所述循环阈值分别与副溶血性弧菌标准曲线、沙门氏菌标准曲线进行对照，获得副溶血性弧菌和沙门氏菌的活菌浓度。本发明创新地将多重荧光定量PCR技术和PMA染料相结合，达到了快速定量南美白对虾中两种重要致病菌活菌的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 同时 定量 南美 对虾 中两种 致病菌 方法 | ||
【主权项】：
一种同时定量南美白对虾中两种致病菌活菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、将叠氮溴化丙锭母液加入待测的南美白对虾虾液匀浆中，获得叠氮溴化丙锭‑样品混合液；暗处理后曝光，高速离心，收集菌体；S2、对所述菌体进行DNA提取；S3、以提取得到的DNA为模板，以副溶血性弧菌的tlh基因和沙门氏菌的orgC基因作为靶基因，进行多重荧光定量PCR扩增反应，输出相应的循环阈值；S4、将所述循环阈值分别与副溶血性弧菌标准曲线、沙门氏菌标准曲线进行对照，获得副溶血性弧菌和沙门氏菌的活菌浓度。
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